肌肽对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移侵袭抑制作用及其机制的研究

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1、中图分类号：R737.9论文编号：2018327009UDC：密级：公开硕士学位论文肌肽对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移侵袭抑制作用及其机制的研究作者姓名：戴世龙学科名称：外科学研究方向：普通外科学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2018年4月10日申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：张青松教授单位：华北理工大学附属开滦总医院论文评阅人：匿名单位：匿名单位：论文答辩日期：2018年5月24日答辩委员会主席：马晓龙教授关键词：肌肽；乳腺癌细胞；PKM；MTA1；PTBP1唐山华北理工大学2018年6月TheInhibitoryEffec

2、tofCarnosineontheProliferation、MigrationandInvasionofMCF-7HumanBreastCancerCellsDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofClinicalMedicinebyDaiShilong(Surgery)Supervisor:Ph.DZhangQingsongJune,2018独

3、创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或

4、部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要目的通过研究肌肽对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制以及迁移和侵袭抑制现象，探讨肌肽的可能作用机制。方法通过MTT实验分别检测实验组及对照组细胞的存活率；细胞平板克隆形成实验分别检测各分组细胞的克隆形成数；细胞划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验分别检测各组细胞的迁移和侵袭能力；实时荧光定量PCR法检测目的基因（PTBP1、PKM1、PKM2和MTA1）mR

5、NA的转录水平；Westernblot检测丙酮酸激酶PKM1和PKM2、肿瘤转移相关蛋白MTA1的表达水平。应用GraphPadPRISM6.0软件及SPSS23.0软件进行统计学分析。结果1MTT实验结果显示，不同肌肽浓度（12.5mM、25mM、50mM和100mM）处理24、48和72h后，乳腺癌细胞的存活率随浓度的增大而降低（F=4.852，P<0.05），具有一定的浓度依赖，但是与时间的关系并不显著（F=1.825，P>0.05），并且经统计学分析发现时间与肌肽浓度之间并不存在交互效应（F=1.829，P>0.05）。2细胞平板克隆形成实验

6、结果显示，人乳腺癌MCF-7细胞经肌肽处理后，与对照组相比可以发现细胞克隆集落数明显减少（F=746.5，P<0.05），各组平板克隆集落数分别为：25mM组克隆集落数为135.00±6.40，50mM组为62.00±7.97，100mM组为7.4±1.34，对照组为223.60±11.35。3Transwell迁移实验结果数据显示，对照组和实验组（25mM、50mM和100mM）平均穿过小室膜的细胞数分别为313.00±23.35、220.60±21.54、132.40±7.77和90.80±5.50个，实验组平均穿膜细胞数量较对照组平均穿膜细胞数

7、显著减少，差异具有统计学意义（F=177.20，P<0.05）。4Transwell侵袭实验结果显示，空白对照组和实验组（25mM、50mM和100mM）平均穿膜细胞数分别为258.60±21.93、178.40±11.26、123.40±13.72和63.60±13.50个，经统计分析后发现，各组间的穿膜细胞数差异明显（F=140.6，P<0.05）；与对照组相比较，实验组的穿膜细胞数均明显减少，且随着肌肽浓度增高，穿膜细胞数随之下降（P<0.05）。5细胞划痕愈合实验结果显示，空白对照组、25mM组、50mM组和100mM组细胞愈合率分别为0.4

8、6±0.02、0.36±0.02、0.27±0.05和0.03±0.02，显著抑制乳腺癌细胞的划痕愈合率（F