下调alk2对人乳腺癌细胞增殖,侵袭和迁移的影响及机制探讨

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1、重庆医科大学硕士学位论文下调ALK2对人乳腺癌细胞增殖，侵袭和迁移的影响及机制探讨姓名：孙笑笑申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：张彦201205重庆医科大学硕士研究生学位论文下调ALK2对人乳腺癌细胞增殖，侵袭和迁移的影响及机制探讨摘要目的探讨活化素蛋白激酶2(ALK2)下调后对MDA—MB．231细胞生物学行为的改变及可能的机制，为乳腺癌的预防和治疗奠定基础。方法用高转移性人乳腺癌细胞MDA—MB．231作为目的细胞，RT-PCR法检测细胞中ALK2的表达情况；DN—ALK2腺病毒感

2、染MDA．MB．231细胞，记为MDA．MB．231／DN．ALK2实验组，RFP腺病毒感染MDA—MB一231细胞，记为MDA．MB．231／RFP实验对照组，MDA．MB．231细胞为空白对照组；用MTT、集落形成、划痕、Transwell侵袭实验分别检测三组细胞的增殖、集落形成、侵袭及迁移能力；分别采用RT-PCR和WesternBlot检测三组细胞中CTGF在mRNA和蛋白质水平的表达情况。将各组细胞按每只裸鼠l×106个细胞分别接种至裸鼠皮下(每组5只)，构建动物模型，成瘤后每3天测量瘤体

3、大小，34天后颈椎脱臼法处死裸鼠，取皮下瘤做组织切片后，免疫组织化学染色法检测结缔组织生长因子(CTGF)在三组中的表达情况。结果MDA．MB．231细胞中存在ALK2的高表达；AdDN．ALK2与AdRFP感染MDA—MB一231细胞36h后荧光表达量一致，约70％；MDA—MB．231／DN—ALK2细胞中高表达DN—ALK2；与对照组细胞相重庆医科大学硕士研究生学位论文比，MDA．MB一231／DN—ALK2细胞增殖能力显著降低；集落形成率由对照的(91．0士3．6)％与(91．3士5．1)％

4、显著下降至(34．0士5．3)％俨

5、／DN-ALK2组CTGF灰度值(0．4684+0．1057)相对于MDA-MB．231／RFP组(0．8407士0．5266)显著下降(PD．05)。体内实验结果显示，对照组第13天开始成瘤，而实验组第16天才开始成瘤，成瘤后每间隔3天测量各组皮下瘤长径和横径以绘制瘤体生长曲线，第34天将所有裸鼠颈椎脱臼法处死，剥离瘤体，测量大小。实验组瘤

6、体体积(0．804士0．090)cm3显著小于对照组的(2．465+0．250)cm3与(2．454士0．250)cm3(尸

7、FECTSANDMECHANISMSOFALK2DOWN．REGULATIoNoNHUMANBREASTCANCERCELLPROLIFERATION，INVASIONANDMIGRATIONABSTRACTObjectiveToinvestigatetheeffectsandpossiblemechanismsofALK2down—regulationonhumanbreastcancercellsMDA—MB-231proliferation，invasionandmigration，thenp

8、rovidingexperimentalbasisforsearchingnewbreastcancertherapeutictargetsandtherapeuticdrugs．MethodsTheexpressionofALK2inMDA--MB··231cellswasdetectedbyRT-PCR；AdenovirusDN—ALK2WasusedtoinfectMDA．MB．231cells．ExperimentalgroupisMDA-MB-231／DN-