没药水提物对HER-2阳性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制研究

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1、授予单位代码１００８９学号或２０１３２１０８申请号欄书分类号歷ｆｌｌｆｃＨｅｂｅｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｉＭｅｄｙ硕士学位论文科学学位－２阳性乳腺癌细胞增殖、迁移没药水提物对ＨＥＲ、侵袭的影响及作用机制研究研宄生：张杰导师：张风华副教授专业：外科学二级学院：河北省人民医院２０１６年３月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺。本学位论文在导师，由本人独立完成本学位（或指导小组）的指导下。河北医科论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河

2、北医科大学所有大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内一、、容相关的论文，试验材料原始数据申，第署名为单位河北医科大学报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。二研究生签名：导师签章级学院领导盖＾＞０／６年以月研１１河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究。成果。本论文由本人独立撰写，文责自负，指导教师对此进行了审定导师

3、签章：研究生签名：０表ｖ／》年彡月／曰目录中文摘要１英文摘要６英文缩写１１ＨＥＲ－２、迁移研究论文没药水提物对阳性乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制研宄ｔｍ１３材料与方法１５號２６酬２９＿３５概４０雜４３参考文献４４综述没药成分抗肿瘤机制研宄进展４８雜６０个人简历６１中文摘要－２阳没药水提物对ＨＥＲ性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制研究摘要目的－２ＨＥＲ－２）阳性：本课题以表皮生长

4、因子受体（乳腺癌细胞株－ＳＫＢＲ－３细胞及其裸鼠皮下移植瘤为研宄对象，给予不同浓度没药水提ＨＥＲ－２阳物，从体内与体外实验两方面研究没药水提物对性乳腺癌－－ＳＫＢＲ３细胞增殖、迁移及侵袭的作用以及相关作用的机制。方法：－－－１取人ＨＥＲ２表达阳性乳腺癌细胞ＳＫＢＲ３细胞，设５０ｕｇ／ｍｌ、１００ｕｇ／ｍｌ、２００ｕｇ／ｍｌ的没药水提物组以及阴性对照组，利用划痕实验及Ｔｒａｎｓｗｅ－－ｌｌ小室实验检测没药水提物对于ＳＫＢＲ３细胞迁移及侵袭的影－ＢＲ－３细胞２４ｈ后响。不同浓度没药水提物作用于ＳＫ

5、，利用免疫荧光及－－免疫印迹法检测各组中Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｎｃａｄｈｅｒｉｎ以及Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达情况及细胞骨架、细胞膜上丝状伪足的变化。－－／、／２腺癌ＳＫＢＲ３细胞，Ｏｕｍｌ５０ｕｍｌ、１００ｕ／ｍｌ、２００ｕ／ｍｌ取人乳ｇｇｇｇ－－、、没药水提物作用ＳＫＢＲ３细胞不同时间（２４ｈ、４８ｈ７２ｈ９６ｈ、１２０ｈ、１４４ｈ）后，观察细胞的增殖情况，台盘蓝拒染法检测各组的活细胞数目，并绘制细胞生长曲线。设置〇ｕ／ｍｌ、５０ｕ／ｍｌ、１ＯＯｕ／ｍｌ、２００ｕ／ｍ、４００ｕ／ｍｌ、ｇｇ

6、ｇｇｇ８００ｕ－－ｇ／ｍｌ没药水提物组作用ＳＫＢＲ３细胞２４ｈ及４８ｈ后，同样选用台盘一。蓝拒染法检测各组的活细胞数目，观察对细胞增殖的影响进步运用流式细胞法（ＦＣＭ）检测没药水提物对各组细胞周期及细胞凋亡的影响。免疫印迹试验方法检测各组中细胞周期相关蛋白ＣｙｃｌｉｎＡ以及凋亡相关蛋白－２－ＢＣＬ、ＢＡＸ、ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ８的表达。－－３取人乳腺癌ＳＫＢＲ３细胞，设５０ｕｇ／ｍｌ、１００ｕｇ／ｍｌ、２００ｕｇ／ｍｌ没药水提物组以及阴性对照组，利，提取蛋白用免疫印迹试验检测分子通

7、路上－－－－－ＭＥＫ－ＨＥＲ２、ＰＨＥＲ２、ＥＲＫ、ＰＥＲＫ、ＭＥＫ、Ｐ、ＡＫＴ、ＰＡＫＴ蛋白表达情况。－－３细ＢＡＬＢ４将ＳＫＢＲ胞接种于／ｃ裸鼠，待成瘤后，将肿瘤剥离，移植至３０只裸鼠皮下，将３０只裸鼠随机分为三组：对照组给予同体积生理－中文摘要盐水灌胃，低剂量组即给予没药水提物１００ｍｇ／ｋｇ／天灌胃，高剂量组给予即没药水提物２００ｍｇ／ｋｇ／天灌胃，每两天测量瘤体大小，绘制瘤体生长曲３。线，干预２天后处死全部裸鼠，剥离瘤体，称量瘤重同时取移植瘤做免疫组化检测ＰＣＮＡ及ｖ。

8、ｉｍｅｎｔｉｎ的表达变化结果：－－－１没药水提物能抑制ＨＥＲ２阳性乳腺癌ＳＫＢＲ３细胞的迁移：－／ｍ、－划痕实验中５０ｕｇｌ、１００ｕｇ／ｍｌ２００ｕｇ／ｍｌ水提物作用ＳＫＢＲ３细胞－－２４ｈ后，与对照组相比，ＳＫＢＲ３细胞迁移距离减小见（Ｔａｂｌｅｌ）。抑制°士０士２