物理干预对乳腺癌细胞增殖、迁移能力的影响及分子机制研究.pdf

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1、分类号：Q42密级：公开学校代码：11065学号：2015010048学术博士学位论文物理干预对乳腺癌细胞增殖、迁移能力的影响及分子机制研究作者姓名尹崇高指导教师孙运波主任医师学科护理学培养单位护理学院答辩日期2018年5月17日物理干预对乳腺癌细胞增殖、迁移能力的影响及分子机制研究摘要目的：本研究主要通过温度和UV（ultraviolet）照射两种物理干预方法探讨体内体外人乳腺癌细胞、小鼠乳腺癌细胞增殖、迁移、miRNA表达水平的变化及对miR-577的靶蛋白RAB25水平的影响，观察物理干预方法对乳腺癌增

2、殖、侵袭转移的基因调控效应的影响，并更深入的阐明物理干预等手段通过诱导乳腺癌细胞中miRNA的变化影响乳腺癌的发生进展、侵袭转移的分子机制，为临床预防乳腺癌的增殖、侵袭转移、个性化治疗和护理措施的制定提供思路和实验依据，以期在临床上更好的为乳腺癌患者提供预防侵袭转移的健康教育措施。方法：1、温度干预（1）应用CCK-8增殖实验检测不同温度干预下人乳腺癌细胞、小鼠乳腺癌细胞及不同温度孵育转染miRNA后人乳腺癌细胞增殖能力的改变；（2）应用Transwell细胞侵袭实验检测在不同温度干预下人乳腺癌细胞和小鼠乳腺

3、癌细胞及不同温度孵育转染miRNA后人乳腺癌细胞的迁移能力的改变；（3）应用实时荧光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR，qPCR）检测不同温度孵育后人乳腺癌细胞中miRNA表达的改变；同时应用qPCR检测转染miRNA的转染效率；（4）用蛋白质印迹（Westernblotting）检测不同孵育温度对人乳腺癌细胞中与miRNA相关编码蛋白的改变；（5）检测不同室温对小鼠体内乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响；应用Westernblotting检测不同室温小鼠肿瘤组织中编码蛋白RAB25的改

4、变；HE染色检测不同室温下，小鼠乳腺癌细胞引起的肺组织中转移的结节数。2、UV照射干预（1）应用CCK-8增殖实验检测UV照射后人乳腺癌细胞及小鼠乳腺癌细胞增殖能力的改变及细胞转染miRNA后UV照射对人乳腺癌细胞增殖能力的改变；I（2）应用Transwell实验检测UV照射对人乳腺癌细胞及小鼠乳腺癌细胞迁移能力的影响及转染miRNA后UV照射对人乳腺癌细胞迁移能力的改变；（3）应用实时荧光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR，qPCR）检测UV照射不同时间后人乳腺癌细胞中miRNA表

5、达的改变；同时应用qPCR检测转染miRNA的转染效率；（4）用蛋白质印迹（Westernblotting）检测不同UV照射时间对人乳腺癌细胞中与miRNA相关编码蛋白的改变。3、临床乳腺癌组织检测用qPCR检测临床乳腺癌患者肿瘤组织及癌旁相对正常乳腺组织中miRNA的改变，同时检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞中miRNA的改变；用Westernblotting检测乳腺癌病人组织中及转染miRNA后乳腺癌细胞中miRNA相关编码蛋白的改变；同时分析乳腺癌组织中miRNA表达与乳腺癌病人临床病理

6、参数及编码蛋白表达的相关性。结果：1、温度干预对乳腺癌细胞增殖、迁移能力、miRNA、编码蛋白及动物模型的影响（1）乳腺癌细胞在不同孵育温度下分别培养24、48、72、96小时，以正常孵育温度37℃做对比，39℃的孵育温度能明显的降低人乳腺癌细胞及小鼠乳腺癌细胞的增殖能力（P<0.05，n=3）；而33℃及35℃的孵育温度能显著增强人乳腺癌细胞及小鼠乳腺癌细胞的增殖能力，不同时间间隔也显示相同的实验结果（P<0.05，n=3）。（2）不同孵育温度下分别培养24、48小时，与正常孵育温度37℃相比，39℃时能降

7、低人乳腺癌细胞和小鼠乳腺癌细胞的迁移能力（P<0.05，n=3）；而33℃及35℃的孵育温度能显著增强人乳腺癌细胞及小鼠乳腺癌细胞的迁移能力（P<0.05，n=3）。（3）不同孵育温度下分别培养24、48小时，与正常孵育温度37℃相比，39℃的孵育温度能显著上调人乳腺癌细胞中miR-577及miR-185-5p的表达水平（P<0.05，n=3）；而33℃和35℃的孵育温度能明显的降低人乳腺癌细胞中miR-577和miR-185-5p的表达（P<0.05，n=3）。但是，人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF

8、-7中miR-96-5p的表达在39℃的孵育温度时明显的降低（P<0.05，n=3）；人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中miR-96-5p的表达在33℃和35℃的孵育温度时明显的II升高（P<0.05，n=3）。结果表明miR-577和miR-185-5p在乳腺癌细胞的发生发展和侵袭转移起着抑癌基因的作用，而miR-96-5p起着癌基因的作用。不同温度下，过表达乳腺癌MDA-MB-231