高效液相色谱法测定睡安口服液中酸枣仁皂苷a和酸枣仁皂苷b的含量

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1、高效液相色谱法测定睡安口服液中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量【摘要】　　目的为睡安口服液建立专属性酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法，蒸发光散射检测器（ELSD）检测。结果睡安口服液中酸枣仁皂苷A在0.928～4.604μg范围内线性关系良好，酸枣仁皂苷B在0.468～2.340μg范围内线性关系良好,酸枣仁皂苷A回收率为97.6%，RSD＝0.9%；酸枣仁皂苷B回收率为97.5%，RSD＝1.9%。结论该HPLC法可做为睡安口服液中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量测定方法。【关键词】睡安口服液；酸枣仁皂苷A；酸枣仁皂苷B；高效液相色谱法

2、　　Abstract：ObjectiveTodevelopaspecialmethodtodeterminethecontentsofjujubosideAandjujubosideBinShuianOralLiquid.MethodsHPLCasilC18columnasanalyticalcolumn.ResultsThelinearrangeofjujubosideAethodcanbeusedfordeterminingthecontentsofjujubosideAandjujubosideBinShuianoralliquid　　Key32色谱工作站数据处理系统，均为美

3、国产；蒸发光散射检测器（ELSD）为德国安捷伦公司产。酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B对照品购自成都思科华生物技术有限公司，用归一化法测定纯度均大于98%；甲醇为色谱纯；水为高纯水；其他试剂均为分析纯；睡安口服液样品由黑龙江省药学研究所提供。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱为KromasilC18柱（4.6mm×200mm,5μm），填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-水-冰醋酸（70∶30∶1）；流速为1.0ml/min；柱温25℃；ELSD氮气流速2.0L/min；漂移管温度94℃；理论板数按酸枣仁皂苷A峰计算应不低于200〔1，2〕。　　2.2对照品溶液的制备　

4、　精密称取酸枣仁皂苷A对照品4.6mg，酸枣仁皂苷B对照品2.3mg，置同一10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.3供试品溶液的制备　　取本品内容物5.0ml，加入5.0ml蒸馏水，混匀，用水饱和正丁醇萃取5次，10ml/次，合并正丁醇层，用正丁醇饱和氨水溶液洗涤两次，20ml/次，取正丁醇层蒸干，残渣用甲醇溶解，定容于5ml量瓶中，摇匀，静置，过0.45μm微孔滤膜，即得。　　2.4标准曲线的制备　　精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10μl，按上述色谱条件进行测定，以对照品进样量为纵坐标，峰面积积分值为横坐标绘制标准曲线，结果表明，酸枣仁皂苷A在0.928

5、～4.640μg，酸枣仁皂苷B在0.468～2.340μg之间均有良好的线性关系，回归方程分别为：Y=1.3964X+11.6745(r=0.9995)；Y=1.4504X+11.3604(r=0.9996)。液相图谱见图1～4。　　2.5精密度实验　　精密吸取对照品溶液5μl，按含量测定项下色谱条件，连续进样5次，分别计算其峰面积值的RSD，结果酸枣仁皂苷ARSD＝1.6%，酸枣仁皂苷BRSD＝2.4%。　　2.6稳定性实验　　精密量取供试品（批号050309）5.0ml，按含量测定项下制备供试品溶液。每隔2h进样1次，进样量10μl，测定5次，结果酸枣仁皂苷A及酸枣仁皂苷B的R

6、SD分别为2.2%和2.6%。　　2.7重复性实验　　精密量取同一批号（批号050309）供试品5份，按含量测定项下方法制备供试品溶液和测定（见表1）。数据表明，本方法重现性较好。表1重复性实验数据（略）　　2.8回收率实验　　精密量取供试品（批号050309）、蒸馏水和对照品溶液（含酸枣仁皂苷A0.464mg·ml-1，酸枣仁皂苷B0.234mg·ml-1）。先将对照品溶剂挥干，再用水溶解与口服液混匀，并用10ml水饱和的正丁醇萃取，然后按供试品溶液制备方法操作，制备供试液，按含量测定项下色谱条件测定。结果见表2。表2回收率实验数据（略）5份样品，酸枣仁皂苷A平均回收率为97.6

7、%，RSD＝0.9%；酸枣仁皂苷B平均回收率为97.5%，RSD＝1.9%，该法回收率较高，方法可靠。　　2.9供试品测定　　取睡安口服液3批，上述方法测定。结果见表3。表33批样品含量测定结果（略）　　3讨论　　《中国药典》（2005版）没有收载酸枣仁单味药材的含量检测方法，文献报道酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量测定也较少，主要方法有薄层扫描法、一阶导数分光光度法等。由于高效液相色谱法常用的紫外（UV）检测器不利于皂苷类成分的检测，本实验选用蒸发光散射（ELSD）