酸枣仁合剂的薄层鉴别及酸枣仁皂苷a的含量测定

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1、酸枣仁合剂的薄层鉴别及酸枣仁皂苷A的含量测定【摘要】目的：建立酸枣仁合剂的鉴别和含量测定方法。方法：采用TLC法和HPLC法。结果：TLC法鉴别酸枣仁合剂中知母、茯苓和川芎等药材；HPLC测定酸枣仁皂苷A的含量，酸枣仁皂苷A在0.55～1.1mg/mL范围内线形关系良好（r＝0.9997），平均加样回收率为100.45%，RSD为1.30%。结论：鉴别重复性好、专属性强，含量测定方法简便，准确。【关键词】酸枣仁合剂；薄层色谱法；高效液相色谱法；酸枣仁皂苷A［Abstract］Objective:ToidentifyRhizomaAnemarrhenae,P

2、oriaandRhizomaChuanxiong,andtoassayjujubosideAinSuanzaorenmixture.Methods:TLCandHPLCethodshog/mL,andtheaveragerecoveryofjujubosideAethodissimple,repeatable,accurate,andcaneffectivelycontrolthequalityofSuanzaorenmixture.［Keyixture;TLC;HPLC;JujubosideA酸枣仁合剂源于酸枣仁汤，出自汉代张仲景《金匮要略·血痹虚劳脉证

3、并治第六》。方中酸枣仁养肝血、安心神为君药；川芎调血养肝、茯苓宁心安神为臣药；知母滋阴降火、清热除烦为佐药；甘草和中缓肝为使药。本方主治肝血不调、虚火内扰心神所致的心烦失眠等症。酸枣仁皂苷A为镇静催眠的有效成分之一，我们在3酸枣仁皂苷A含量测定3.1色谱条件采用HypersilC18（4.6mmID×150mm，5μm）色谱柱，以乙腈水（30∶70）为流动相，检测波长为204nm，流速0.8mL/min，柱温25℃。理论塔板数按酸枣仁皂苷A计算，不低于5000，酸枣仁皂苷A与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，见图1。图1酸枣仁皂苷A液相色谱图3.2供试

4、溶液的制备取酸枣仁合剂供试品10mL，置于处理好［装大孔树脂（20mm×150mm），用60%乙醇洗柱至无色，再用蒸馏水洗柱至无色，备用］的大孔树脂上，依次用蒸馏水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇洗涤小柱，分别洗至流出液无色，控制流出速度为2～3mL/min，用液300mL，收集60%乙醇洗脱成分，旋转浓缩至干，残渣用甲醇溶解，并定容为2mL，摇匀，离心，取上清液进样。3.3标准曲线的制备精密称取酸枣仁皂苷A对照品0.0110g，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，备用。分别精密吸取酸枣仁皂苷A对照品溶液（1.1mg/mL）适量，注入高效

5、液相色谱仪，记录色谱图。以对照品峰面积为纵坐标，以对照品量（mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线得回归方程：Y=1.677×105X-8.672×104（r＝0.9997）。酸枣仁皂苷A在0.55～1.1mg/mL浓度范围Y与X呈良好线性。3.4精密度试验精密吸取对照品溶液10μL，进样5次，峰面积积分值的RSD为1.13%，表明仪器进样精密度良好。3.5重复性试验取同一批样品，制备6份供试样品溶液，并测定其酸枣仁皂苷A含量，6份含量的RSD为0.99%。3.6加样回收率试验取已知含量的一批酸枣仁合剂（0.233mg/mL）10mL，分别加入酸枣仁皂苷A溶液

6、1.60、2.0、2.4mL（浓度为1.2mg/mL），按“供试溶液的制备”方法进行处理测定并计算回收率，平均加样回收率为100.45%，RSD为1.30%，见表1。3.7样品的测定取酸枣仁合剂供试品（批号为041101、041102、041103、050101、050102、050103）各10mL，按“1.3.2项下”方法制备，并测定含量，结果分别为：0.231、0.234、0.235、0.227、0.236和0.233mg/mL。表1酸枣仁皂苷A的加样回收率注：酸枣仁合剂中酸枣仁皂苷A含量为0.233mg/mL，平均加样回收率为100.45%。4讨论

7、酸枣仁中化学成分复杂，且酸枣仁皂苷A结构中无共轭体系，紫外吸收波长较短，检测极易受到干扰。对药材的测定，采用石油醚脱脂，氨水对正丁醇层进行碱化处理的方法，取得了很好的分离效果，且重现性良好。酸枣仁合剂中，成分复杂，黄酮类成分在紫外区的干扰，处方中知母、甘草也含有皂苷，对酸枣仁皂苷A的测定影响很大，因此在纯化过程中，既要排除黄酮类的干扰，也要排除其它皂苷的影响。对供试样品的预处理方法进行了筛选，索氏提取的酸枣仁合剂供试品，用水饱和的正丁醇萃取，发现干扰明显，酸枣仁皂苷A峰太小；选用大孔树脂柱处理，其主要用于水溶性化合物的分离纯化（因其在有机溶剂中的吸附能力极

8、小），多用于皂苷及其它苷类化合物的分离。实验中，我们使用20%、4