反相高效液相色谱法测定酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷a与酸枣仁皂苷b的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A与酸枣仁皂苷B的含量论文周庆武，李玲玲，纪标，徐垣义【摘要】目的建立酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A与酸枣仁皂苷B的含量测定方法。方法反相高效液相色谱法，采用HypersilC18柱为分析柱，使用以乙腈和水为流动相的二元梯度洗脱方法，检测波长为201nm，流速为1ml·min-1。结果酸枣仁皂苷A在50.01～198.2μg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998,n=5),平均回收率为99.41%；酸枣仁皂苷B在66.25～209.0μg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系

2、(r=0.9998,n=5).freelethodforthedeterminationofJujubasideAandJujubasideBinZiziphusjujubaMill(ZJM)Granules.MethodsAnRP-HPLCmethodn.Themobilephaseconsistedofacetonitrileand.ResultsThecalibrationcurveofJujubasideAl-1,theaveragerecoveryl-1,theaveragerecoveryethodisappr

3、opriateforthedeterminationofJujubasideAandJujubasideB.Keya；甲醇、乙醚等均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；纯净水自制。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为HypersilODSC18型色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：最初7min为乙腈-水(28∶72)，7～13min内乙腈浓度梯度上升为35%，维持至22min，22～25min内乙腈浓度上升为45%，35min结束，20min平衡。流速：1.0ml·min-1；检测波长201nm；柱温25℃

4、。数据处理方法：外标峰面积法。理论塔板数按酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B计不得低于2500。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液分别精密称取酸枣仁皂苷A对照品和酸枣仁皂苷B对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.15mg酸枣仁皂苷A和0.15mg酸枣仁皂苷B的溶液，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，续滤液作为对照品溶液。2.2.2供试品溶液精密称取本品7.5g，置烧杯中，加5%的氢氧化钠溶液50ml使之完全溶解，并全部转移至分液漏斗中，乙醚脱脂3次，30ml/次，弃去乙醚层，下层液

5、挥尽乙醚后，用水饱和的正丁醇萃取3次，30ml/次，合并正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，10ml/次，正丁醇液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，续滤液作为供试品溶液。2.3线性关系考察分别精密称取酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B对照品适量，加甲醇溶解并定容至50ml，分别精密量取3.0，5.0，10.0，15.0，20ml置于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，备用。分别精密取上述滤液10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，分别以浓度为横坐标

6、，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，得回归方程分别为：酸枣仁皂苷A：Y＝2.7435x+31.769，r＝0.9998酸枣仁皂苷B：Y＝3.3137x-15.154,r＝0.9998结果表明，酸枣仁皂苷A在浓度为50.01～198.2μg·ml-1的范围内线性良好，酸枣仁皂苷B在浓度为66.25～209.0μg·ml-1范围内和峰面积呈良好的线性关系。2.4专属性实验按样品工艺制备缺酸枣仁的阴性样品，照“2.2.2”项下操作，制备阴性对照品溶液。进样10μl进行测定，结果阴性对照样品在与对照品溶液及样品溶液中酸枣仁皂苷A与酸枣

7、仁皂苷B相应的保留时间处无吸收峰出现。见图1。2.5精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6次，记录色谱图，测定峰面积，计算，结果酸枣仁皂苷A峰面积的RSD为0.43%，酸枣仁皂苷B峰面积的RSD为0.39%，表明精密度良好。2.6重复性实验精密称取本品6份（批号04051401），7.5g/份，按供试样品溶液的制备方法制备供试液。各进样10μl，记录色谱图，测定峰面积，计算，结果酸枣仁皂苷A峰面积的RSD为0.69%，酸枣仁皂苷B峰面积的RSD为0.71%，表明重复性良好。2.7稳定性实验取重复性实验中6号样品，

8、分别于0，2，4，6，8h测定，取10μl注入液相色谱仪，结果酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B在8h内峰面积积分值基本不变，其RSD值分别为0.79%和0.94%，说明室温放置8h稳定。2.8加样回收率实验精密称取一批已知含量的中试产品9份（批号04051401）；按80%，100%，120%的比例加入酸枣仁