中药复肝春6号体外诱导小鼠肝癌h22细胞凋亡实验研究

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1、中药复肝春6号体外诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡实验研究：张永英刘福英张焕铃王俊霞【摘要】目的：探讨中药复肝春6号（Fuganchun6,FGC6)诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的机理。方法：将FGC6制成水煎剂，过滤，最后用微孔滤膜过滤除菌。药物浓度以生药计。采用MTT法计算FGC6对H22细胞的半数致死量浓度和琼脂糖凝胶电泳对药物诱导的凋亡细胞进行DNAladder分析，流式细胞术检测药物作用下的细胞凋亡率和细胞周期时相变化，透射电镜检测凋亡细胞超微结构的变化。结果：FGC6对H22细胞的半数致死量浓度为240mg/mL。D

2、NAladder分析药物组可见明显的凋亡梯状条带。FGC6作用下的小鼠H22肝癌细胞周期时相发生变化，随药物浓度的增加细胞凋亡率明显上升。透射电镜下FGCⅠ组细胞具有明显的坏死特征。FGCⅡ组肿瘤细胞可见明显的凋亡特征。结论：复肝春6号可以使体外培养的H22细胞染色体DNA断裂，阻滞在细胞周期的G1/G0期，使H22细胞的超微结构改变等途径诱导细胞凋亡。【关键词】复肝春6号；细胞凋亡;细胞周期；肝肿瘤；H22细胞；小鼠【ABSTRACT】Objective:Toinvestigateapoptosisofhepaticac

3、arcinomacellinducedbyFuganchun6.Methods:FGC6hadbeenboiledininedbyMTT,DNAladderanalysisfortumorcellsinedthroughFCM,andalsomorphologicexaminationoftumorcellsg/mL.DNAladderstripscouldbeseeninFGC6Group,stagechangesofcellscycleseltedandexpanded.Partofcellnucleusmembrane

4、inFGCIIGroupstuckupoutsideandbecamerotundity.Conclusion:FGU6canbreaktheDNAofH22cellsregularly,FGU6bringsabouttheapoptosisofH22cellsmainlythroughblockingitsgroorphologicchanges.【KEYice随着实验模型和检测方法的完善，细胞凋亡的研究日益受到医学和药学领域的重视。在国家自然科学基金委员会临床基础学科发展战略调研报告中，多次强调了细胞凋亡研究的重要性，

5、并将其列为肿瘤、心血管等重大疾病今后研究的方向之一。细胞凋亡在肿瘤发生发展中的重要作用及潜在意义已成为生物医学领域研究的热点和前沿之一。近年来，中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究越来越多，一些从中药中提取的生物碱以及有关单味药诱导肿瘤细胞凋亡的研究报告较多，而目前中药复方诱导肿瘤细胞凋亡的报告较少。复肝春6号（FGC6）是由河北省中医院毛宇湘副主任医师根据多年临床经验拟定的，由黄芪、女贞子、牡蛎、鳖甲、莪术、白花蛇舌草、薏苡仁、半枝莲、桔梗等中药组成。方中黄芪、女贞子补气养阴，扶正固本；白花蛇舌草、半枝莲、薏苡仁清热解毒，软坚散结；莪

6、术、桔梗理气活血，消肿散积；诸药合用，可共奏益气养阴，清热解毒，健脾利湿，软坚散结之功。临床试验发现此方剂对减轻中晚期肝癌患者的痛苦，延长患者生存期、提高生活质量有明显的效果。本研究目的是通过观察FGC6对体外培养H22细胞增殖的抑制作用以及肝癌细胞凋亡的生化及形态学变化，从细胞、分子水平探讨该方药抗肝肿瘤作用的机制，旨在为其临床应用提供实验依据。1材料与方法1.1细胞株小鼠肝癌细胞株（H22细胞即YAC1细胞株）由河北医科大学实验动物学部实验动物研究室提供。1.2药物FGC6方剂中各单味中药均购自乐仁堂大药房，配伍后，以

7、蒸馏水浸泡1h，水煎两次后混匀，过滤并浓缩，置于4℃冰箱储存备用。氟尿嘧啶注射液(5Fu)：上海旭东海普药业有限公司生产，产品批号为051104。1.3主要仪器及试剂低温冰箱、流式细胞仪（美国BD公司）、透射电镜（日立H7500）、酶标分析仪等。DNAMarke（SABC公司产品）。1.4MTT法测定药物对H22细胞的半数致死量浓度试验设6个组，其中2个对照组，阳性对照5Fu组（50μg/mL）及正常对照组（NS组）；另设4个药物浓度组，FGCⅠ组（480mg/mL)、FGCⅡ组(240mg/mL)、FGCⅢ组(120

8、mg/mL)、FGCⅣ组(60mg/mL)，每组8个重复。本试验采用96孔板培养，取对数生长期H22细胞，将其细胞浓度调整为1×105个/mL，每孔加入150μL，37℃、5%CO2饱和水汽二氧化碳细胞培养箱中培育24h后，阳性对照组加入5Fu50μL。正常