贵州优质高产茯苓菌株分离纯化筛选及应用研究

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1、贵州大学硕士学位论文贵州优质高产茯苓菌株分离纯化筛选及应用研究姓名：屈直申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：刘作易20070501贵州优质高产获芩苣抹分离纯化筛选反应用研究原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究在做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：，屡鱼日期：2QQ2生￡旦关于学位论文使用授权的

2、声明本人完全了解贵州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权贵州大学．-j-以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，．-j-以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文．(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：盟导师签名：甚拈巴红日期：蛐贵州优质高产获芩酋株分离纯化筛选及应用研完摘要真菌茯苓(Wolfiporiacocos(Schwein．)RyvardenetGilbn．)的干燥菌核，是我国珍贵的传统中药

3、材。茯苓的药用价值和营养价值极高，保健作用独特，经济价值可观，应用前景广阔。本试验对采自贵州的10个野生茯苓菌核和3个人工栽培茯苓菌核进行组织分离，对所得分离菌株进行菌丝形态及荧光核染色显微观察；筛选适合其生长的最适母种、原种培养基。以13个茯苓野生及人工栽培菌核分离株、中国微生物菌种保管委员会收录菌株(6株)以及国内主栽品种(4株)作为试验对象，对其进行菌丝生长初筛、原种培养复筛，筛选出黎13、台17、剑19、剑20号4个优质高产菌株，这4个菌株在野外栽培生产试验中发菌情况良好，采收后测定菌核总重／蔸、结苓个数／蔸、

4、最大个苓重、单蔸最高产量等产量指标，结果发现各项指标均优于对照中5号菌株，结苓率为100％，4株菌株个苓形状规则，肉质纯白，无砂苓，无跑苓现象，结实程度(比重)较好，具有结苓性能好、产量高、质量好等特点。对上述4个优质高产菌株进行遗传特性鉴定，结果显示其遗传稳定。在上述试验基础上建立优质高产菌株筛选模型，为今后茯苓菌株选优及生产研究等提供现实依据。测定供试菌株在木屑培养基上的生长速率及其向木屑培养基中分泌的CIVIC酶活力，并对两者进行相关性分析，相关系数为0．951977，表明两者问具有一定的相关性。但测定滤纸酶活力

5、为阴性。本试验利用RAPD技术对23株供试菌株进行引物筛选，从41条引物中筛选了17条对供试菌株扩增重复性好、谱带清晰，具有一定多态性的引物，进而对10株外来菌株和贵州道地茯苓菌核分离株进行遗传分析和鉴定，通过数据分析建立无根树，探讨其亲缘关系。RAPD分析结果显示不同来源的茯苓菌株亲缘关系非常相近，但在某些引物的扩增物上存在较小的差异，所得聚类结果与23株菌株形态特征的鉴定结果基本一致。这表明采用RAPD技术对茯苓菌株的聚类分析有助于这些菌株亲缘关系及同源性的研究，可为道地茯苓的检测、鉴定提供分子生物学依据。通过比较

6、两种保藏方法、不同保藏时问茯苓菌种的菌落形态、菌丝体生物量及其液体培养基和固体培养基上的生长规律，发现甘油菌种保藏法和斜面菌种保4贵州大学2007届硕士研究生掌位论文藏法对茯苓菌种的保藏效果均较理想。关键词：茯苓优质高产菌株纤维素酶RAPD菌种保藏5贵州优质高产获芩蕾诛分离纯化筛选及应用研究AbstractThedryingsclerotiumoffungusWolfiporiaCOCOS(Wolfiporiacocos(Schwcin．)RyvardcnetGilbn．)isatraditionalcostfulme

7、dicineinChina．Wol／iporiaCOCosispromissingbecauseofitshighmedicalvalue．excellentnutritionalvalue,uniquehealthyFunctionendconsiderableeconomicvalue．Organisationseparationofsclerotiumo／wildWolfiportaCOCOSfromguizhouandWolfiporia●·●，COCOSofartificiⅪcultivationw∽done

8、．micro-morphologicalobservationendobservationbyfluorescentHOECHST33258StainwTeredoneinthispaper．Theoptimummediumoffemaleparentendmotherseedwerescreenedoutinthisexperi