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《高产几丁质酶菌株的筛选与ck13菌株几丁质酶的纯化与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名签字日期:年/月夕日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解江西师范大学研究生院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被査阅和借阅。本人授权江西师范大学研究生院
2、可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）导师签名：1燮韦'签字日期:万/年/月0口几丁质(chitin)又名甲壳素，是地球上蕴藏量最丰富的有机物之一。每年的生物合成量达100亿吨之多，其年产量仅次于纤维素，储量居第二位，是地球上一种取之不尽用之不竭的可再生天然资源。几丁质酶能专一性催化水解N•乙酰・D•葡萄糖胺糖昔键，降解几丁质得到几丁寡糖、水溶性几丁质或N•乙酰氨基葡萄糖。从微生物中筛选产几丁质酶菌株,并进行酶的研究，不仅具有一定的
3、学术价值，而且对几丁质天然资源的清洁生产与广泛利用，如生物防治、环境保护、医药食品等领域的应用都具有重要的实际意义。本研究对高产几丁质酶的菌株进行了较广泛的筛选，从江西地区河流、湖泊的泥样与中药材枯萎中分离、筛选出90株可产几丁质酶的菌株，作为高产几丁质酶的候选菌株。对其中一株具有明显产几丁质酶能力的CK「3,进行了酶的分离纯化与酶学研究。经初步鉴定，CKi・3菌为酵母菌。优化了菌株CKr3的发酵条件。确定了其产几丁质酶最适培养基组分为：胶体几丁质8.0,蛋白陈5,酵母膏5,K2HPO40.7,KH2PO40.3,MgSO4・7比00.5
4、,FeSO4•7H2O0.01,ZnSO40.01,PH6.8；最适产酶培养条件为：培养基起始pH值6.8,接种量l・4%(w/v),以250ml三角瓶装瓶量为50ml,培养温度30°C,180r/min摇瓶培养120h,发酵液酶活力可达2.51U/mL.建立了菌株CK「3发酵液中几丁质酶的分离纯化条件。发酵液经冷冻离心后，上清液85%冰酒精沉降、离心.溶于少量的蒸憾水中，制得几丁质酶粗提液。粗酶液经SephadexG-100筛分纯化后，即获得大分子几丁质酶。酶纯化倍数为6.61,收率为37.2%。SDS-PAGE电泳显示为电泳纯，分子量
5、为46000Da。对CKi・3菌株产几丁质酶进行酶学性质的研究,结果表明该几丁质酶的最适反应温度为50°C,最适反应pH为6.0；酶活力在pH6・0〜7・5之间时相对稳定;Mg2^对酶的活性有较好的促进作用，而Zn2+、Fe叭Cu2Mn"等离子对酶活力均有不同程度的抑制。关键词：菌株筛选；几丁质酶；发酵；纯化；鉴定AbstractChitinisoneofthemostabundantorganicsintheworld.Everyyear,thesyntheticamountofchitincanreachmorethantenbil
6、lion,thestockpileofchitincomessecondaftercellulose,it'saninexhaustiblerenewablenaturalresourcesintheworld.ChitinasespecificallycancatalysethereactionofhydrolyzingchitinintoN-acetylglucosamine(GlcNac),Water-solublechitinand(GlcNac)n・Studyonscreeningchitinaseproducingbacate
7、riafrommicrobehaveevidentsciencevalue,andalsohasgreatpracticalsignificanceincleanerproductionandwideuseofnaturalchitin,suchasbiologicalcontrol,environmentalprotection,foodandmedicalexploitation•Thisexperimenthaveextensivescreenedwiththehigh-producingchitinasesrtains,andha
8、veselectedouteighty-ninechitinase-producingstrainswhichhavebeenusedascandidatestains•WealsoIsola
