碱性脂肪酶高产菌株serratia+sp.sl11的筛选与酶的分离纯化与部分性质研究

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1、摘要碱性脂肪酶高产菌Serratiasp．SL-11的筛选及酶的分离纯化与部分性质研究生物化学与分子生物学专业硕士研究生李长春指导教师唐云明教授(摘要)从重庆市北碚区附近汽修厂、火车站、油脂厂等地方采集163份土样、油样，筛选得到一株高产脂肪酶的野生细菌，命名为sL一11．根据茁体形态的显微观察和16SrDNA序列分析，经初步鉴定表明，该菌株为沙雷氏菌属(Serratia)。对产酶发酵条件进行了优化，确定最佳培养基组成为：黄豆饼粉4．096；蔗糖0．5％：橄榄油I．o％：K2HPO．0．2％；NaH：POt0．1％：MgS04·7H200．1％：TweenSO0．5％，pH8

2、．0。最佳摇瓶培养条件为：温度32℃，转速为200r／min，优化条件后产酶量可达到优化前的2—3倍，经5代培养，该菌株产酶能力稳定。对其所产脂肪酶进行了分离纯化。菌体发酵液经过超滤浓缩、DEAE—Sepharose离子交换和Superdex200凝胶过滤等步骤处理，得到2个同工酶，命名为SLP一1、SLP一2。比活力分别为669015U／mg、5770．50U／mg；最终被纯化了4067年【I35．08倍：回收率分别为20．9％、3．3％．经电泳检测均达到了电泳纯。通过对两种同工酶的部分酶学性质的研究，发现其中SLP—l最适pH为9．0，最适温度为50。C，分子量约为319

3、KD，亚基分子量为74．9KD；SLP一2最适pH为9．0，最适温度为47。C，分子量约为377KD，弧基分子量为77．6KD。测试了Mn”、Ga”、c。”、Fe”、Cu”、K‘、Mg”、Li’等八种金属离子对酶的作fq，发现这两种酶对金属离子均很敏感，Mn“、Ga”、M92+对其酶活性具有强烈的激活作用，摄高可使酶活提高14倍，仅Co“、Fe”对SLP一2活性具有一定的抑制作用。由Serratia印SL一11产生的脂肪酶具有较高的温度耐受性和较高的pH适应范同，具有良好的开发前景。关键词：脂肪酶沙雷氏菌属筛选纯化性质AbstractScreening，purificatio

4、nandcharacterizationofthelipaseproducedbySerratiasp．SL一11Discipline：BiochemistryandMolecularBiologyDirection：EnzymologyandEnzymeEngineeringSupervisor：Prof．TangYunmingMasterCandidate：LiChang-ChunAstrainoflipaseproducingbacteriumwasisolatedformsoilonbeibei．Itiside—ntifiedasSerratiaby16srDNAse

5、quenceanalyseandnamedasSerratiasp．SL一11．FactorsaffectingtheSerratiasp．SL一11lipaseproductionwereinvestigatedinsh—akeflasklevel．Obtainedresultshowedthattheoptimummediumcompositionandculturalconditionwere(％)：soybeanpowder4．0，sucroseO．5，oliveoil1．0，K2HP040．2，NaH2P04，MgS04·7H200．1，Tween800．5andn

6、itializepHwas8．0，30。C，200dminshaking，for22h．Undersuchconditionsthelipaseactivityinculturesupernatantwas2-3timeshighastheoriginalone．Thelipasewaspurifiedtoconsistedofsequentialultrafi{tration．ion—exchangechromatographyonDEAE—Sepharoseandsuperdex200gel-chromatography．Obtainedtwolipasesample，n

7、amedasSLP一1andSLP一2．anditsspecificactivitywas6609．15U／mgand5770．50U／mg；purified40．67一foldand35．08一fold．Yieldwas20．9％and3．3％．somecharacteroftheenzymearealsoinidentified，TheoptimumtemperatureoflipaseSLp一1is50。CandtheoptimumpHis9．0．Themolecularweightofthepu