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1、英文摘要SHANDONGＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ山东理工大学毕业设计（论文）题目:SNAP25-N蛋白高表达菌株筛选及分离纯化学院：生命科学学院专业：生物技术学生姓名：郭飞指导教师：刘翠翠毕业设计（论文）时间：2016年3月2日～6月15日共17周II英文摘要SNAP25-N蛋白高表达菌株筛选及分离纯化摘要SNAP25（synaptosomalassociatedproteinof25KD，突触小体相关蛋白）是一种可溶性的N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性因子结合蛋白受体(SNARE
2、),位于质膜的胞浆面,是由两个SNAREmotif（形成SNARE复合体的结构域）以及中间的连接部分组成。突触小体相关蛋白能够介导神经细胞中在神经突触上发生的囊泡的融合，在神经递质的释放中具有重要作用。SNAREmotif结构域是由四条α-螺旋组成的，呈正向平行排列互相结合为排列紧密的杆。这四条α-螺旋中，其中一条来自VAMP，一条来自Syntaxin，一条来自SNAP25的N端结构域（SNAP25-N），一条来自SNAP25的C端结构域（SNAP25-C）。SNARE复合体参与囊泡融合，参与囊泡的对
3、接及融合，以及由囊泡和细胞膜参与的胞吐行为。SNAP25-N蛋白对囊泡转运、突触融合及细胞信号转导有重要意义。连接部分具有四个半胱氨酸，半胱氨酸通过棕榈酰化将SNAP25锚定在靶膜附近。这意味着SNAP-25不含有跨膜结构域。实验的目的是通过对SNAP25-N蛋白菌种的活化，单克隆培养，诱导表达等过程，筛选出具有高表达量的SNAP25-N菌株，其中要通过调节培养的温度、培养的时间、转速、诱导剂的量等条件来选育出能够表达出目标蛋白SNAP25-N的高产菌株。进而利用摸索出的条件进行扩大培养，获得大量目标
4、菌液，进行离心、细胞破碎，然后通过柱层析法获得所需要的目标蛋白，应用SDS-PAGE凝胶电泳来检测所获得的目标蛋白是否正确,并且检测杂蛋白是否洗净。最后选取含量较高的蛋白溶液通过标准曲线测得蛋白浓度。通过实验，在操作过程中掌握相关的实验方法，熟练仪器的使用，规范的实验操作，提高实验能力。关键词：SNAP25-N、高产菌株、扩大培养、蛋白含量II英文摘要AbstractSNAP25isakindofsolubleN-ethylmaleicimidesensitivityfactorbindingprot
5、einreceptors,locatedinthecytoplasmofplasmamembranesurface,ismadeupoftwoc2-stylemotif,andinthemiddleoftheconnectionparts.Synapticcorpusclerelatedproteinplaysanimportantroleintheneurotransmitterrelease,canbemediatedthefusionofthesynapticvesicle.Domainc2-s
6、tylemotifstructureiscomposedoffouralphahelix,positivelytoparallelarrangementincombinationwitheachotherforcloselypackedrod.Thesefouralphahelix,onefromtheVAMP,fromaSyntaxin,afromSNAP25n-terminaldomainstructure,afromSNAP25thec-terminaldomainstructure.C2-st
7、ylecomplexinvesiclefusion,participateinthedockingandfusion,andbythevesiclesandparticipateinthemembranecellbehavior.SNAP25-nandvesiclestranshipment,synapticfusionproteinandcellsignaltransduction.Connectionparthasfourcysteine,homocysteinethroughpalmacylat
8、ionanchorSNAP25nearthetargetfilm.ThismeansthattheSNAP-25doesnotcontaintransmembranedomainstructure.IsthepurposeoftheexperimentthroughactivationofSNAP25-Nproteinstrainsofmonoclonalculture,inducedprocess,suchasfilterwithhighexpress
