辛伐他汀对骨关节炎软骨保护作用的实验研究

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1、第四军医大学博士学位论文辛伐他汀对骨关节炎软骨保护作用的实验研究姓名：吴银松申请学位级别：博士专业：外科学（骨科）指导教师：胡蕴玉20070501第四军医大学博士学位论文缩略语表缩略语英文全称中文全称AAbsorbance吸光度AnteriorcruciateligamentACLT前交叉韧带切断transectionCMCCarboxymethylcellulose羧甲基纤维素Dubeco'smodifiedeagleDMEMDMEM培养基mediumDMSODimethylsulphoxide二甲基亚砜GAGGlycosamininoglycan糖胺多糖3-hydroxy-3-

2、methyl-glutaryl-羟甲基戊二酰辅HMG-CoACoA酶ALDHLactindehydrogenase乳酸脱氢酶MMPMatrixmetalloproteinase基质金属蛋白酶MVAMevalonate甲基二羟戊酸NonsteriodNSAIDS非甾体类抗炎药anti-inflammatorydrugsODOpticaldensity光密度OHProHydroxyproline羟脯氨酸PGProteoglycan蛋白多糖链酶亲和素-生Streptavidin-biotin-peroxidasSABC物素-过氧化物ecomplex酶复合物SOSafranin-O番红花N

3、,N,N',N'-tetramethylethylenTEMED四甲基乙二胺ediamine1第四军医大学博士学位论文独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：保护知识产权声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权

4、的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名：导师签名：日期：第四军医大学博士学位论文辛伐他汀对骨关节炎软骨保护作用的实验研究博士研究生：吴银松导师：胡蕴玉教授（主任医师）第四军医大学西京医院骨科，西安，710032中文摘要骨关节炎（OA）是老年人活动能力丧失的最重要原因。随着世界范围的老龄化趋势

5、，OA的发病率呈持续增长。但是，由于缺乏对其发病机理的深入认识，目前尚无有效的预防及治疗方法。OA可在多个关节发病，但多数发生在髋关节和膝关节，国人多累及膝关节，尤其多见于绝经后女性。OA的特征性病变为关节软骨的破坏，病变逐步发展可导致关节软骨下骨的硬化、囊性变，关节囊增厚、纤维化等，最终关节变形，功能丧失。在OA中，软骨基质代谢的失衡与关节软骨破坏直接相关。促进软骨基质的合成代谢，抑制分解代谢有望延缓甚至逆转关节软骨的破坏过程，成为目前研究重点。在OA软骨分解代谢过程中，基质金属蛋白酶（MMP）活性显著增加，是目前OA药物靶向治疗的研究热点。他汀类药物能显著降低粥样动脉硬化患者的

6、病死率，其机理为抑制粥样斑块内MMP的表达和活性，稳定胶原基质，从而降低斑块破裂的机率。在心血管以外的其它组织中，也有他汀抑制MMP的活性的研究报道。同时，他汀具有抑制炎症反应的作用。因此，本课题设想他汀能通过此机制抑制OA2第四军医大学博士学位论文中软骨的破坏。本研究在细胞、组织和动物体内三个水平探讨了辛伐他汀对OA软骨的保护作用。首先在软骨细胞原代培养中，利用明胶酶谱法检测辛伐他汀处理前后软骨细胞产生MMP-2活性的变化；然后建立体外软骨组织块培养模型，观察辛伐他汀对软骨基质分解代谢的影响；最后建立兔膝关节OA模型，探讨辛伐他汀对OA的治疗作用。本研究的内容和结果如下。1.辛伐

7、他汀对兔关节软骨细胞活性的影响取4周龄新西兰兔双侧膝关节关节软骨，用II型胶原酶消化后分离软骨细胞进行原代培养。第三代细胞进行体外药物实验，分为辛伐他汀组、双氯芬酸组、地塞米松组及空白对照组，药物终浓度设为0.01μM，0.1μM，1μM和10μM。加入药物培养48h后，采用MTT法检测各种药物对细胞活性影响。结果表明，本实验所采用的各种浓度的辛伐他汀及双氯芬酸和地塞米松对软骨细胞活性无明显影响，可用于进一步实验。2.辛伐他汀对IL-1α诱导软骨细胞表达MMP-2活性