降钙素对兔骨关节炎关节软骨的保护作用

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1、降钙素对兔骨关节炎关节软骨的保护作用【关键词】降钙素　　摘要：〔目的〕研究降钙素(calcitonin，CT)对骨关节炎关节软骨的保护作用。〔方法〕6个月龄新西兰大白兔20只，随机分为两组均行右膝关节前交叉韧带切断术。1周后实验组开始皮下注射降钙素5IU／kg，每日1次；对照组注入等剂量生理盐水；术后6周处死动物。取股骨内髁制成切片行HE、番红“O”和Ⅱ型胶原免疫组化染色。HE切片按照Mankin评分表评分。番红“O”染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色切片用图像分析仪，测量平均灰度值。〔结果〕(1)对照组术侧膝关节组织学Mankin评分结果、番红“O”染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色平均灰度值

2、测量结果高于健侧，（P001）。（2)对照组手术膝关节组织学评分、番红“O”染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色平均灰度值测量结果高于实验组手术膝关节，（P005）。〔结论〕降钙素5IU/kg每日1次皮下注射够明显减轻兔膝关节不稳定诱发的骨关节炎关节软骨的退变。降钙素可能通过提高软骨基质糖胺多糖(glycosaminoglycans，GAG)和Ⅱ型胶原含量保护关节软骨。　　关键词：降钙素；骨关节炎；灰度值　　Abstract：〔Objective〕Toassessentalosteoarthritis.〔Method〕TonthNely.Allrabbitsunderenttransect

3、ion(ACLT)ontherightknee.Rabbitsofexperimentalgroupbegantoreceiveadaffysubcutaneousinjectionofsalmoncalcitoninatadoseof5IUperkgofbodyalsaline(NS)atthesamedose.Allrabbitsinedgrosslyandhistologicallyandscored;themedialcondylesectionsmunohistochemistryofcollagenII.ankin法〔5〕评分；番红“0”染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色切片

4、用HPIAS-1000系列多功能真彩色病理图像分析系统软件分析，分别于10倍物镜下以负重区为中心，在关节软骨图像辐射层和柱状层各随机取10个区域测定其灰度值以均值表示测定结果。　　15统计学分析方法　　全部数据采用spss100统计软件，作t检验。　　2结果　　21肉眼大体观察结果　　对照组健侧膝关节外观正常，关节滑液清，关节面光滑，关节软骨略显淡蓝色，有光泽。对照组术侧膝关节肿胀严重，胫骨平台和股骨髁均可见骨性肥大。滑液色黄且混浊，滑膜亦呈黄色。关节面粗糙不平整、无光泽，颜色暗红，关节软骨破坏，关节边缘有大量骨赘形成，符合骨关节炎病理特点。实验组术侧膝关节稍肿胀，未见胫骨平台和

5、股骨髁有骨性肥大。滑液淡黄色。关节面欠光滑，无光泽，部分区域颜色发暗，有少量骨赘形成。实验组手术膝关节损害较对照组手术膝关节轻。　　22细胞形态学观察　　对照组健侧膝关节股骨内髁关节面平整，光滑，HE染色基质染成粉红色，着色均匀，软骨细胞核呈深蓝色，细胞层次清楚，排列整齐，大小均一(图1)。　　对照组术侧标本可见关节面大部分区域粗糙，可见达软骨中层和深层的裂隙或缺损，裂隙周围可见大量细胞克隆现象及克隆细胞周围大量软骨细胞消失(图2)，基质染色重度不均，软骨细胞排列紊乱；有的区域软骨细胞核消失，留下空的软骨囊。有的切片可见明显的丘状隆起的骨赘。　　实验组术侧部分区域关节面粗糙；基质

6、染色中度不均，可见细胞簇聚多见，有的可见少量的软骨细胞坏死区，细胞克隆现象偶见(图3)。按Mankin评分标准结果见表1。表1三组膝关节标本光镜下Mankin评分结果(略)　　23三组膝关节番红“0”和Ⅱ型胶原免疫组化染色切片灰度值　　番红“0”染色软骨细胞核和基质均染成粉红色，空白对照组着色均匀；ACLT组基质染色重度不均，可见细胞克隆和细胞减少；ACLT+CT组可见关节面粗糙，基质染色轻度不均(图4～6)。Ⅱ型胶原免疫组化细胞基质染成棕黄色，各组情况与番红“0”染色相似(图7～9)。灰度值测量结果见表2。表2番红“0”及Ⅱ型胶原免疫组化灰度值(略)　　3讨论　　本实验结果发现

7、细胞组织形态学评分对照组术侧膝关节明显高于对照组健侧。表明本实验的骨性关节炎动物模型复制成功。番红“0”染色灰度值和II型胶原免疫组化染色灰度值测量术侧高于健侧，表明术侧GAG和Ⅱ型胶原含量低于健侧，说明在OA进程中伴随着GAG和Ⅱ型胶原的破坏和丢失。　　实验组术侧和对照组术侧关节细胞组织形态学评分后者明显高于前者，说明对照组术侧关节软骨损害大于实验组术侧，表示降钙素对关节软骨有保护作用，这与Badurski〔3〕和ManicourtDH〔4〕等研究结果一致。同时，对照组番红“0