血管肉皮细胞生长因子对体外培养大鼠凋亡椎间盘细胞的影响

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万方数据V01．272009No．13血管肉皮细胞生长因子对体外培养大鼠凋亡椎闾宣细胞的髭响胡龙(兰州大学第一医院，甘肃兰州730000)摘要：目的观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对体外培养大鼠椎问盘细胞及基质代谢的影响。方法建立大鼠椎间盘细胞培养体系，体外单层培养大鼠椎间盘细胞，取生长良好的第2代细胞实验，使用抗一Fas抗体诱导凋亡，加入不同浓度(10，100，1000叫L)的碱性成纤维生长因子影响椎间盘细胞的凋亡及代谢过程，利用流式细胞仪一PI标记法检测椎间盘细胞凋亡情况；利用氯胺-T法和DMB比色法分别检测细胞培养液中羟脯氨酸及蛋白多糖的含量。结果(1)不同浓度的血管内皮细胞生长因子(10，100，l000¨dL)椎间盘细胞凋亡率(87．62±11．06)％、(53．30±9．23)％、(16．75“．21)％与正常组比较均有显著性差异(P方法，因遗传信息分辨力高、结果重现性好而被广泛用于传染病的分子流行病学调查吒本研究采用PFGE技术调查一起由宋内氏志贺菌引起的幼儿园食物中毒事件，对分离到的菌株进行了分子流行病学观察，并结合流行病学资料对暴发和可能的传染来源进行分析。l流行病学资料甘肃省武威市凉州区是国家痢疾监测点。此次发生食物中毒事件的武威市实验幼儿园，位于凉州区西大街共和街，该园有教职工53名，儿童502名，共计13个班，全部日托，规定每日3餐在幼儿园用餐。13个班均有发病，年龄为3-6岁。2007年9月19Et出现首发病例，截止9月21日17：00时在武威市人民医院、凉州区医院、市中医院、区中医院、区三院和肿瘤医院住院治疗儿童共307名，其中临床诊断病例261名，实验室确诊病例61名。病儿有相同的临床表现，以发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等消化道症状为主；病儿发病集中在3天内(同一潜伏期内、同一临床表现)。病儿有2次食用带有宋内氏志贺菌的2000，25(2)：166-169．【11]KatoY。Gcopedarowic=D．Sulfatedproteoglyeansynthesisconfluentcultureofrabbitc06talchondrocytesgrowninthepresenceoffibroblau伊owthfactor[J]．JCellBid，1985，100：477-．485．【12]LetticeJ，OegeraaTR，JohnsonS，et-1．Invivoregenerationofc,sninc原料猪肉的情况，导致439名就餐儿童中的307名儿童患病。病儿排泄粪便经实验室检查为粘液性、脓血便，从病儿158份大便中培养检出61株宋内氏志贺菌，检出率达38．61％。在幼儿园和医院采集38份样品中，从病儿所食用的剩余原料猪肉中检出1株宋内氏志贺菌，烹调加工的食物未留样。根据流行病学资料，推测该食物中毒事件是由食用未加工熟的猪肉菜肴引起。2材料与方法2．1蕾侏来蠢64株测试菌中，有2株(菌株编号GS0768、GS0787泼拯河疖凉州区国家监陨n点2007年8月份散发腐例分离株，其它62菌株均为本次食物中毒的分离菌株，其中病儿粪便分离株61株，食物原料标本分离株1株。所有菌株经实验室鉴定，确定为宋内氏志贺菌。参考菌幌澌1菌H9812，由中国疾病预防控制中心传染腐所提供．为全鼠耐黜实验室监测网络PulseNetChina中的际准菌株。2．2t姜攸器与试剂CHEFDRⅢ型脉冲场电泳仪，QuantityOne(4．4．0)凝胶成像系统(美国Bio—Rad公司)，细菌浊度仪BioMerieuxVitekColorimeter，SeakemGold胶(美国Cambraex公司)。蛋白酶K(MERCK)，限制性内切酶】【baI(大连宝生物工程有限公司)。2．3实验方法根据文献口方法进行PFGE分型，略有改动：取新鲜琼脂培养intervertebraldiscbyinfusionofSrowthfactorB[J]．OrthopTram，1992．16(1)：1．【131MinamideA，HashizttmeH．YohidaM。ele1．Effects缸basicfibroblastgro,ah￡actorfactoronspontaneoussorption0fherniatedintevertebaldisc：：anexperimentalstudyintherabbit[J]．spine．1999,24：940—945．A一115—