神经生长因子对体外培养大鼠角膜缘干细胞的作用

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1、《中国图书资料分类法》分类号:单位代码：10660R329.24学号：S100035贵阳医学院2013届硕士学位论文神经生长因子对体外培养大鼠角膜缘干细胞的作用研究生：刘强导师：苏敏教授黄悦副教授年级：2010级专业：人体解剖与组织胚胎学2013年5月20日贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„5结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„11讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„19参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„23英文摘要„

2、„„„„„„„„„„„„„„„„„„27致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29略缩词表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„30论文原创性声明„„„„„„„„„„„„„„„„31附：综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„331贵阳医学院2013届硕士研究生论文神经生长因子对体外培养大鼠角膜缘干细胞的作用专业：人体解剖与组织胚胎学研究生：刘强导师：苏敏教授黄悦副教授摘要：目的：观察神经生长因子（NGF）对体外培养角膜缘干细胞（LSCs）增殖的影响，及其受体在LSCs上的表达与细胞增殖的关系。方法：体外培养LSCs，分对照组和NGF组传代培养，分别选取各组培养24h、72h和5

3、d的细胞，免疫细胞化学检测p63、TrkA、p75表达，免疫荧光检测PCNA表达，Tunnel法检测细胞凋亡率。相关数据作统计学分析。结果：①NGF组各时间点p63表达平均灰度值分别为（24h：104.58±1.16；72h：106.72±1.01；5d：108.15±1.05），明显低于对照组(24h：134.80±1.66；72h：123.34±1.58；5d：119.47±1.27)，P＜0.05，②NGF组各时间点PCNA表达平均荧光强度（24h：66.55±2.10，72h：69.44±2.11，5d：68.67±2.89）高于对照组（24h：61.40±2.05，72h：6

4、2.27±1.97，5d：63.50±1.81），P＜0.05；③NGF组各时间点TrkA表达平均灰度值（24h：107.87±1.49，72h：108.38±1.81，5d：112.13±1.76）低于对照组（24h：156.15±2.05，72h：129.59±1.97，5d：127.13±1.74），P＜0.05；④NGF组各时间点p75表达平均灰度值（24h：83.58±1.22，72h：83.37±1.19，5d：82.02±1.31）低于对照组（24h：88.10±1.67，72h：91.93±1.14，5d：105.95±1.18），P＜0.05；⑤凋亡检测，NGF组各时

5、间点细胞凋亡率（24h:12.60±2.20%，72h:13.35±1.76%，5d：13.91±2.95%）低于对照组（24h：14.76±1.41%，72h：18.36±4.79%，5d：21.12±3.62%），P＜0.05；⑥Pearson相关分析TrkA表达平均灰度值与p63表达平均灰度值，P＜0.05有统计学意义。结论：NGF可促进和维持LSCs的体外扩增和生长，降低凋亡发生，有维持LSCs的干细胞特性的作用，LSCs可表达NGF受体TrkA和p75，且TrkA的表达与LSCs的增殖有相关性。关键词：大鼠角膜缘干细胞NGFp63PCNATrkAp752贵阳医学院2013届硕

6、士研究生论文前言神经生长因子（NervousGrowthFactor.NGF）是最先被检测到的神经营[1]养因子家族成员，属于分泌型糖蛋白，其沉降系数为7S，由三种肽链组成分[2]别是：α、β、γ；其中β链为NGF的活性区。NGF最早在鸡胚中发现，其在胚胎期具有促进神经生长发育的作用，维持交感神经和感觉神经的生长发育及功能，促进神经细胞分化，决定轴突的伸长方向，近几年实验表明高浓度NGF[3]能促进干细胞分化。NGF通过相应的受体作用于靶细胞，主要研究的NGF受体有[4]两种：TrkA和p75；TrkA是一种酪氨酸蛋白激酶型受体，分子量140kDa，与NGF具有高亲和力，TrkA与NG

7、F结合域为类似抗体结构，TrkA与NGF结合后能激活丝[5]裂原蛋白激酶级联（ras/Map激酶,磷脂酶Cγ,和PI3激酶），调节细胞增殖；能通过激酶激活来转换营养信号。第二种受体p75，分子量75kDa，该受体分布[6]广泛，属于肿瘤坏死因子受体家族，与NGF亲和力低；能与多种神经营养因子[7]结合，与神经营养因子结合部位为半胱氨酸富集区，并优先与神经营养因子前体结合，不同的配体结合不同部位，造成p75不同构象改变。同时，TrkA的表达被认为