胚胎大鼠纹状体区神经干细胞的体外培养

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1、Aug.2009,Volume6,No.8(SerialNo.57)美中医学JournalofUS-ChinaMedicalScience,ISSN1548-6648,USA胚胎大鼠纹状体区神经干细胞的体外培养王晓峰，刘建新，李拴德，张荣军，杨兴奎（解放军第三医院神经外科研究所，陕西宝鸡721004）摘要：目的探讨胚胎大鼠纹状体区神经干细胞的培养、分化和鉴定技术。方法从胚胎大鼠纹状体区分离神经干细胞，用无血清培养技术进行体外原代培养、传代，加血清进行诱导分化。荧光免疫染色技术进行鉴定。结果从胚胎大鼠纹状体区分离出神经干细胞，并可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论采用该体外

2、培养技术分离的纹状体区神经干细胞可在体外大量增殖，并有多向分化潜能。关键词：纹状体；胚胎；神经干细胞Cultivationofembryonicstriatum-neuralstemcellsfromratinvitroWANGXiao-feng,LIUJian-xin,LIShuan-de,ZHANGRong-jun,YANGXing-kuiAbstract:ObjectiveToexplorethecultivation,differentiationandindentificationofembryonicstriation-neuralstemcellsfromrat.Met

3、hodsTheadvantageofserumfreeandcloneculturingtechnologywasperformedtoisolate,cultere,passageandinduceneuralstemcellsfromembryonicratcortex,hippocampusandstriatum.Immunofluorescencewasappliedtoidentifytheneuralstemcellsandtherepotentialofdifferentiation.ResultsThecultivatedcellshadtheabilitytopro

4、liferatecontinuouslyandcultivationdifferentiatedintoneurons,astrocytesandoligodendrocytes.ConclusionThetechniqueoftheseparationofinvitroneuralstemcellsinthestriatummayproliferatealargenumberinvitroandhavemoredifferentiationpotential.Keywords:embryonic;striatum;neuralstemcells神经干细胞（Neuralstemcel

5、l，NSC）因其具有极大的增殖潜能，并能分化为神经元、神经胶质1.材料与方法细胞等神经系统细胞，且无产生畸胎瘤的危险，是1.1材料和试剂神经系统细胞治疗的良好移植材料。但从成体获得15d孕龄大鼠胚胎；DMEM/F12培养基、表皮神经干细胞材料来源稀少，难以识别，分化和纯化，生长因子（epidermalgrowthfactor，EGF）、碱性成难以有足够的细胞数量用于移植而限制了其临床纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor，应用。而胚胎干细胞可在体外无限扩增，易于遗传bFGF）、青链双抗、神经元特异性烯醇化酶（neuron操作，因此，胚胎细胞是再生移植

6、供体的理想来源[1]specificenolase，NSE）抗体、胶质纤维酸性蛋白。本研究在无血清培养条件下，利用特定的生长（filialfibrillaryacidicprotein，GFAP）抗体、小鼠因子，使大鼠胚胎NSC稳定增殖传代并可分化出抗大鼠单克隆巢蛋白（nestin）抗体购自美国Sigma神经系统的三种基本细胞，为进一步探讨大鼠胚胎公司；B27、胎牛血清（fetalcalfserum，FCS）购NSC移植的临床研究奠定基础。【作者简介】王晓峰（1972-），男，解放军第三医院神经外科研究所，神经外科学硕士；研究方向：神经外科疾病的综合治疗。19胚胎大鼠纹状体区神经干细

7、胞的体外培养自Gibco公司。在基础培养基中加入下列成分：20细胞大量减少，培养板底见许多细胞碎片，部分胞μl的EGF，10g/L或20g/L的bFGF，20mg/L的体较大、圆形、折光性较强的悬浮细胞发生分裂，B27.1％青链双抗，配制成NSC无血清培养液。部分细胞有出芽现象（不对称分裂）。3d后逐渐形1.2NSC的分离及原代培养及传代成由数个细胞组成的细胞球，7d时细胞呈碎渣样[2]参照冯力等的研究方法，取孕龄15d的大鼠死亡，存活细胞以单细胞或细胞球