兔角膜缘干细胞体外无血清培养及生物学特性研究

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1、铃举县．，j／＼●·密级：单位代码：学号：10114201030958兔角膜缘干细胞体外无血清培养及生物学特性研究研究生：指导老师：申请学位门类级别：专业名称：研究方向：所在学校：黄晓梅马蕾副教授医学硕士眼科学眼屈光及年龄相关眼第二临床医学院2012年5月6日学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。

2、本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：l、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：垄磋釜昏日期：一垃笔——上学位论文版权使用授权书日本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论

3、文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：—二羹l堇仁指导教师签名：(本声明的版权日期：丑忙屯上月掣同日期：上业年—卜月三耻日，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使山西医科大学硕士学位论文目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．II前。言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1月lJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4耋日木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24山西医科大学硕士学位论文兔角膜缘干细胞体外无血清培养及生物学特性研究摘要目的：在不添加血清(2％B27代替血清)的条件下对新西兰大白兔(New．ZealandRabbit)角膜缘干细胞进行培养，观察所培养的干细胞的生物学特性，并与传统添加血

6、清(浓度为10％)培养的兔角膜缘干细胞进行比较，进而探讨兔角膜缘干细胞体外无血清培养方法，为构建组织工程化角膜及角膜基础研究积累实验资料。方法：(1)无菌条件下获取兔角膜缘组织，采用酶消化法(DispaseII)制成单细胞悬液，然后分别用含2％B27(无血清组)及10％胎牛血清(10％血清组)的DMEM／F12(1：1)培养液稀释成等密度的细胞悬液。(2)将两组细胞悬液直接接种于培养瓶(倒置显微镜下观察两组细胞的生长情况)或96孔板(CCK．8检测其克隆增殖能力)。(3)原代培养至第3天、第5天行ANp63及角蛋白K3(AE5)免疫荧光染色，分别对培养的两组细胞进行

7、干细胞鉴定并进一步进行比较。结果：(1)于倒置显微镜下观察可见含2％B27的无血清组培养的兔角膜缘干细胞表现出与传统含10％胎牛血清的10％血清组培养的角膜缘干细胞相似的生长特性。(2)CCK．8细胞增殖能力检测所得细胞生长曲线显示两组细胞表现出相似的增殖能力：对数增殖期大约在第3～5天，之后增殖缓慢进入生长平台期。(3)细胞免疫荧光染色显示含2％B27的无血清组培养的兔角膜缘干细胞中大多数细胞dNp63表达阳性而角蛋白K3(AE5)表达阴性，且与传统10％血清组培养的角膜缘干细胞相比，原代培养第3天ANp63表达阳性率相似(P>0．05)，原代培养第5天ANp