兔骨髓间充质干细胞体外培养及生物学特性研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果兔骨髓间充质干细胞体外培养及生物学特性研究【摘要】目的：进一步研究兔骨髓间充质干细胞分离和培养方法及其生物学特性，为利用MSCs作为种子细胞治疗多种疾病提供实验基础。方法：通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养兔MSCs。测定其接种贴壁率，在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化，利用甲基噻唑基四唑法测定MSCs生长曲线，并应用流式细胞术测定细胞表面标记物。结果：MSC

2、s接种1h后贴壁率为5%以上，细胞倍增时间约为，平均传代时间约~d；培养的MSCs阳性表达CD29、CD44、CD105，阴性表达CD34。结论：在适宜的实验条件下，体外培养的MSCs能够稳定生存增殖并保持多向分化潜能，可作为组织工程的种子细胞。【关键词】骨髓间充质干细胞；生物学特性；细胞培养TheBiologicalCharacteristicsandCultureinVitroofRabbitBoneMarrow-derivedMesenchymalStemCells〔Abstract〕Ob

3、jectiveTofurtherstudytheisolationandcultivationproceduresofmesenchymalstemcellsfromrabbitinvitro,andexplorethEirbiologicalproperties.Tobuildanexperimentalbasis课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题

4、具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果onapplyingMSCsasseedcellstotreatmanydiseases.MethodsMSCswereobtainedfromtibiasbydensitygradientcentrifugationandweretestedtherateofadhesion.Theconfigurationwasobservedunderphase-contrastmicroscopeconsecutivelyandthecel

5、lgrowthwasmeasuredbyMTTmethod.Cellcycleandsurfaceantigensweredetectedthroughflowcytometer.ResultsThesubculturedcellsshowedactiveproliferativeability.Morethan5%ofsubcelturedMSCswereadhesivein12h.MSCswerepositiveforCD29,CD44,CD105andnegativeforCD34.Con

6、clusionInpresentculturecondion,MSCsshowedstableandrapidgrowthinvitro.ThecharacteristicsmakeitpossibletoMSCstobetheseedcellsfortissueengineering.〔KeyWords〕Mesenchymalstemcells;Biologicalcharacteristics;Cellculture　干细胞是具有自我更新能力，且在适宜微环境下具有多系分化潜能的原始细胞[1]

7、。近年研究发现，机体内除胚胎干细胞外还存在具有自我更新和分化能力的成体干细胞。其中骨髓中的干/粒细胞包括间充质干细胞，造血干细胞及网状内皮系统。MSCs可在体外扩增并有多向分化潜能[2-4]，课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果且取材方便，免疫耐受性、遗传背景稳定及易于转染外源基因等，因而

8、作为组织工程“种子细胞”有“广泛的应用前景”[5-8]。本实验通过对兔MSCs体外培养法及其生物学特性进行研究，以建立一套稳定、成熟的兔MSCs培养方法，从而为细胞移植等组织工程提供种子细胞来源提供实验基础。1材料及方法主要试剂与仪器低糖DMEM培养基、10%胎牛血清、%胰蛋白酶、Ficoll淋巴细胞分离液、CD29、CD34、CD44、CD10单克隆抗体和FITC标记的二抗、MTT、倒置相差显微镜、细胞培养箱、流式细胞仪及超净工作台等。1.实验动物普通级健康新西兰大耳白兔，雌性，兔龄约个月。1