SB203580对NO诱导兔关节软骨细胞NF-κB表达的影响.doc

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1、SB203580对NO诱导兔关节软骨细胞NF-κB表达的影响作者：王红林　王治伦　陈静宏　吴劲　考希宾　高艳【摘要】　　目的探讨p38MAPK抑制剂SB203580对软骨细胞NFκB蛋白表达的影响。方法体外培养兔关节软骨细胞，经甲苯胺兰染色鉴定后，一氧化氮(NO)供体NOC18和p38MAPK抑制剂SB203580作用于细胞24h，用MTT比色法检测细胞增殖活性，Westernblot测定NFκBp65亚单位蛋白表达水平。结果与对照组比较，NOC18能抑制软骨细胞MTT增殖活性(P<0

2、.05)；NOC18诱导的NFκBp65活性的升高被SB203580抑制(P<0.05)，而仅有SB203580作用于细胞时，与对照组比较，差别无统计学意义(P>0.05)。结论p38MAPK促进了NO诱导的兔关节软骨细胞NFκB的表达，NO致软骨细胞凋亡的信号通路中涉及了NFκB的活性表达。【关键词】NO；SB203580；软骨细胞；NF-κB　　EffectofSB203580onNFκBexpressioninduced　bynitricoxideinrabbitarti

3、cularchondrocytes　　ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectofp38MAPKinhibitorSB203580onchondrocyteproteinexpressionofNFκB.MethodsRabbitarticularchondrocyteswereculturedinvitro,andidentifiedusingtoluidinebluestaining.Followingtreatmentwithnitricoxide(NO)do

4、norNOC18andp38MAPKinhibitorSB203580for24h,weperformedMTTassaytoevaluatetheproliferationofcells,andWesternblottingtodeterminetheproteinexpressionofNFκBp65.ResultsNOC18significantlyreducedchondrocyteproliferation,comparedwithuntreatedcontrols(P<0.0

5、5);SB203580wasabletosuppresstheacceleratedactivityofNFκBp65inducedbyNOC18(P<0.05).However,therewasnosignificantdifferencewhentreatedonlywithSB203580,comparedwiththecontrol(P>0.05).ConclusionThep38MAPKpromotesNOinducedrabbitarticularchondrocyte

6、NFκBexpression,andtheincreaseofNFκBexpressionisinvolvedinNOinducedchondrocyteapoptosispathway.　　KEYWORDS:nitricoxide(NO);SB203580;chondrocyte;NFκB　　软骨细胞在炎症刺激或外源性一氧化氮(nitricoxide,NO)供体如硝普钠(sodiumnitroprusside,SNP)、亚硝基化合物(nitrosocompound,NOC)等作用下可产生大

7、量NO[1]。越来越多的证据表明，NO与骨关节疾病的发病机制密切相关[23]，它能抑制软骨细胞增殖,诱导软骨细胞凋亡[465]。Kim等研究认为，p38丝裂原激活的蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase,MAPK)通路在NO诱导软骨细胞凋亡中发挥了重要作用，其机制可能为：NO激活p38，继而活化核因子κB(nuclearfactorkappaB,NFκB)，再经由复杂通路最终导致软骨细胞发生凋亡[6]。另有研究报道，p38虽参与了IL1引起的软骨损伤，但p3

8、8MAPK信号通路与IL1诱导的NFκB活性无关。因此，p38和NFκB是两条不同的引起软骨细胞损伤的通路[7]。本实验通过体外培养兔关节软骨细胞，研究p38MAPK抑制剂SB203580对软骨细胞活性以及NFκB蛋白表达的影响，为了解软骨细胞凋亡发生的机制和指导骨关节疾病的治疗提供依据。　　1材料与方法　　1.1材料3周龄新西兰兔1只，重约0.5kg；Ⅱ型胶原酶、透明质酸酶、胰蛋白酶(美国Sigma公司产品)；DME/F12细胞培养液(美国Hyclone公