坎地沙坦对豚鼠心房肌细胞钾通道电流的影响.doc

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1、坎地沙坦对豚鼠心房肌细胞钾通道电流的影响作者：周美丽　柳茵　刘维军　李琳　张爱元　康白　　【摘要】目的研究坎地沙坦对正常豚鼠心房肌细胞内向整流钾电流(Ik1)和延迟整流钾电流(Ik)的影响，旨在为临床上应用坎地沙坦预防房颤发作和复发提供理论依据。方法酶解法分离豚鼠单个心房肌细胞，应用全细胞膜片嵌技术，在不同嵌制条件下，记录并分析坎地沙坦对豚鼠单个心房肌细胞Ik1及Ik的影响。结果坎地沙坦对IK1无影响，但可明显抑制Ik。结论坎地沙坦抑制Ik，使动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)延长，改善房颤电重构及它的现在已明确的抑制结构重构的作用共

2、同参与房颤发作和复发预防的机制。　　【关键词】坎地沙坦；豚鼠；心房肌细胞；钾通道；膜片嵌技术　　　　【Abstract】ObjectiveTostudytheefectsofcandesatanondelayedrectifierK+currentandinwardcurrentk+currentinguineapigcardiacatriummyocytes.MethodsWhole-cellpatch-clamptechniquewasused.ResultsCandesatanhadnoeffectsonIk1Ikwasinhibi

3、tedbycandesatan(from0．95±0．04pA/pFto0．45±0．03)pA/pF,n=5,P<0．05).ConclusionCandesataninhibitingIkmightbegoodnesstoblockingelectricalremodelinginatrialfibrillation.　　【Keywords】Candesatan；Guineapigs；Cardiacatriummyocytes；Potassiumchannels；Patchclamptechniques　　　　　　血管紧张素Ⅱ受体

4、拮抗剂(ARB)诞生于上世纪九十年代，一直以来，被广泛应用于高血压治疗及相关靶器官的保护，目前一系列临床实验结果均提示血管紧张素II受体拮抗剂可预防房颤的发生和复发[1，2]，但具体机制尚不清楚。有研究报道，血管紧张素Ⅱ对心肌细胞的电生理作用是通过受体影响离子通道活性而实现的[3]，坎地沙坦是一种选择性血管紧张素Ⅱ亚型I受体(AT1)阻断药，本研究采用膜片钳全细胞记录方法观察它对延迟整流钾通道电流(Ik)及对内向整流钾通道电流(IK1)的影响,探讨坎地沙坦对心肌细胞电生理作用的机制，从而为坎地沙坦应用于临床预防房颤发生和复发提供理论依据。　　

5、1材料与方法　　1．1实验动物健康成熟豚鼠，雌雄均可，体质量200~250g，由山东医科大学实验动物中心提供。　　1．2药品和试剂EGTA、HEPES购自Amresco公司，EGTANa2-ATP、小牛血清蛋白(BSA)为Sigma产品，胶原酶Ⅱ购于invitrogen公司，实验药物坎地沙坦纯粉由黄海制药厂惠赠，其余为国产分离纯。　　1．3液体组成(单位均为mmol/L)①正常台氏液：NaCl135，KCl5．4．HEPES10，NaH2PO40．33，MgCl21．0，CaCl21．8，葡萄糖10(用NaOH调pH至7．35~7．38)

6、;②无钙台氏液：NaCl135，KCl5．4．HEPES10，NaH2PO40．33，MgCl21．0,葡萄糖10(用NaOH调pH至7．35~7．38);③4记录Ik的电极内液：KCl140，HEPES5，EGTA10，Na2-ATP2．0，MgCl21．0(用KOH调pH至7．3)；④记录Ik1的电极内液：KCl140，Na2ATP2．0，HEPES5．0，MgCl21．0，EGTA10(用KOH调pH至7．3);⑤记录钾电流的电极外液：NaCl135，　　KCl5．4，MgCl21．0,CaCl21．0，NaH2PO40．33，葡萄糖5．

7、0，HEPES5．0．CaCl20．2(用KOH调PH至7．35~7．38)。　　1．4豚鼠单个心房肌细胞的分离采用Langendorff灌流酶解分离法。选健康成年豚鼠，腹腔注射3％戊巴比妥钠1mg/kg，并注射肝素200U/kg，麻醉约5~10min，仰卧位固定后，开胸暴露心脏,把　　4℃无钙台氏液滴在心脏上,以降低其氧耗。剪开心包,取出心脏,置于4℃无钙台氏液中,清洗并游离主动脉根部，然后迅速将心脏悬挂于Langendorff装置上用动脉夹固定，行主动脉逆行灌注，灌流速度为5~10ml/min，依次灌无钙台氏液、含0．03胶原酶(Coll

8、agenaseII．Sigma)的低钙(25μmol/L)台氏液、KB液。以无钙台氏液灌流5~7min后，换以含牛血清白蛋白(BSA，0．02%)