全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用.doc

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1、全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用作者：刘学　单伟　曾瑞霞　房艳　李德华　秦书俭【摘要】目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸，探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN）对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法①将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorathioatesenseoligodeoxynucleotides，PS-SODN）组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorat-hioateantisens

2、eoligodeoxynucleotides，PS-ASODN）组；②脂质体介导的细胞转染后，PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h，分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性，说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性；②吖啶橙染色观察细胞形态:PS-ASODN作用的卵巢

3、癌HO-8910细胞有明显凋亡现象，凋亡细胞体积缩小，染色质浓缩，说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡；③MTT实验：PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖(P<0.0l)，并呈一定剂量和时间依赖关系；④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期：与空白对照组比较，PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多，差异显著（P<0.01）；在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰，表明细胞被阻止在G1/S期。结论①PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后，卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制，并出现凋亡；②PS-ASODN对

4、端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系，即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大；③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖，其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡，PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。　　【关键词】　　端粒酶全硫代反义寡聚脱氧核苷酸；卵巢癌HO-8910细胞；端粒酶；细胞凋亡　　　　【Abstract】ObjectiveInthisstudy，weapplyOligonucleotideaimeddirectlyathumantelomeraseRN

5、A（hTR）,TostudytheeffectsoftelomerasePhosphorathioateantisenseoligodeoxynucleotides(PS-ASODN)ontelomeraseactivityandproliferationofHO-8910ovarycarcinomacell.Methods①HO-8910ovarycarcinomaCellwastransfectedbyPS-ASODN,Phosphorathioatesenseoligodeoxynucleotides（PS-SODN）mediatedbyLipotapLipo

6、somalTransfectionReagen.Theexperimentswereclassifiedintonormalgroup、PS-ASODNgroupsatvariedconcentrations、PS-SODNgroupandoligofectamineTMalone.②TheproliferationactivityofHO-8910ovarycarcinomacelllinewasdeterminedbyusingmethyl9thiazolyltetrazoliumassay.Thetelomeraseactivitywasdeterminedb

7、yusingenzyme-linkedimmunosorbentassay.Thecellmorphologywasobservedbyfluorescencemicroscopestainedwithacridineorange.Flowcytometrywasadoptedtoexamineapoptoticrateandcellcycle.Results①WithELISA,TelomeraseofHO-8910ovarycarcinomacellwasrepressedbytelomerasePS-ASODNafter72hlater,itshowedt