生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用论文

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1、生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用论文.freelangastriccarcinomacelllineSGC7901.MethodsASODNtargetingsurvivincontrolgroup.freeletry，therateofinhibition（IR）bycolorimetricMTTcellviability.proliferationassay.ResultsTheexpressionofsurvivininSGC7901cancercellsdecreasedafterbeingtransfectedaybedecreas

2、edingastriccancercellsafterASODNtransfection.SurvivinASODNcaninduceapoptosisandinhibitpro-liferationofSGC7901cells，andhence，may组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义链转染对照组（Lip-SODN组）和反义链转染组（Lip-ASODN组），每组设3个复孔。将脂质体分别与正、反义寡核苷酸混合，制成脂质体-寡核苷酸复合物，调节寡核苷酸终浓度为0.5μmol.L，分别作用于Lip-SODN组和Lip-ASODN组;Lip组用单纯的脂质

3、体，用量与以上2组相同。细胞转染过程按转染试剂盒说明书进行，48h后收集各组细胞并用于后续实验。1.2.3TT法检测各组细胞的生长抑制率收获的各组细胞用含10%小牛血清的RPMI1640重悬，在倒置显微镜下计数细胞，调整细胞浓度为1×107.L，并接种于96孔板内，每组设置5个复孔。常规条件下培养48h，每孔加入5g.L的MTT20μl，继续培养4h，倾尽上清。每孔加入二甲基亚砜0.1ml，摇床上摇动约15min以充分溶解，用酶标仪在波长570nm处检测各孔吸光度值（A值），细胞生长抑制率（IR）=（1-实验组平均A值）.空白对照组平均A值×100%。1

4、.2.6统计学处理采用SPSS10.0软件，应用方差分析、q检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1ASODN转染后SGC7901细胞生存素蛋白表达变化Lip-ASODN组生存素蛋白表达下调，与各对照组比较差异有统计学意义（P0.05），而各对照组生存素蛋白表达无明显改变，各对照组间差异无统计学意义（P0.05）（图1）。图1各组细胞生存素蛋白表达（略）与其他组比较:*P0.052.2ASODN转染对细胞凋亡率的影响ASODN转染可诱导SGC7901细胞凋亡，Lip-ASODN组细胞凋亡率明显高于各对照组（P0.05），而各对照组间比较差异无统计

5、学意义（P0.05）（表1）。表1ASODN转染对细胞凋亡率的影响（略）与各对照组比较:*P0.052.3ASODN转染对胃癌细胞增殖的影响ASODN转染的SGC7901细胞生长抑制率明显高于各对照组（P0.05），空白对照组、单纯脂质体对照组和正义链转染对照组间差异无统计学意义（P0.05）（表2）。表2各组SGC7901细胞的生长抑制率（略）与各对照组比较:*P0.053讨论机体维持正常形态和功能的重要方面是机体细胞增殖和凋亡的平衡，这种平衡依赖机体正常的网络调控系统的调控，但当各种致瘤因素同时或（和）序贯的方式作用于机体时，调控机体细胞增殖和凋亡平

6、衡的网络系统可能会发生紊乱，导致机体细胞增殖和凋亡的平衡受到破坏。细胞增殖的增加和凋亡的减少都可以是肿瘤发生的原因，在细胞凋亡的途径中的调节异常也可能导致肿瘤的发生，并且可以影响肿瘤患者的预后或导致肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性［5］。目前的研究显示，几乎所有的肿瘤都有不同程度的增殖旺盛和凋亡减少。在胃癌的发生发展过程中同样存在增殖和凋亡的失平衡，研究表明某些基因的表达与增殖和凋亡的状况有密切关系。近来发现一种新的凋亡抑制因子survivin，属于凋亡抑制蛋白（IAP）家族的新成员，定位于人类染色体17q25，具有抑制细胞凋亡的作用。一般而言，经典的凋亡途

7、径有两条，即线粒体途径和死亡受体途径。bcl-2和bcl-xl多阻断线粒体途径，而survivin是直接阻断2条凋亡途径下游的共同通路，即caspase-3和caspase-7凋亡效应蛋白的活性，所以它是一种双重阻断。survivin在细胞中的表达具有严格的细胞周期性，在G2.M期特异性表达。并且survivin的表达具有高度特异性，在大多数肿瘤组织和胚胎发育组织中表达，在成人的子宫内膜组织、胎盘和胸腺组织中有不同程度的表达，而在正常成人终末分化组织中不表达［6-7］。大量研究表明:survivin在非小细胞肺癌、胃癌组织或细胞株中均可被检测到［8-9］

8、，且其表达往往与上述肿瘤的恶性程度、预后不良呈正相关。研究表明，survivin