奥曲肽对人胃癌细胞增殖的抑制作用研究论文

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1、奥曲肽对人胃癌细胞增殖的抑制作用研究论文杜文琪张南征马文青【摘要】目的观察奥曲肽(octreotide,OCT)对人胃癌细胞多种生物学行为的抑制作用,并探讨部分机制。方法MTT比色分析法测定OCT对胃癌细胞系MKN45生长的影响,流式细胞术检测细胞周期的改变,平板集落实验观察细胞集落形成能力,裸鼠移植瘤形成实验体内观察OCT对胃癌的作用,放免法观察OCT对细胞因子生长抑素(epidermalgroinggrool/L作用最强;OCT诱导肿瘤细胞发生G0/G1期阻滞,以OCT作用24h时最明显;OCT可显著抑制细胞的集落形成能力,并显著抑制裸鼠移

2、植瘤的形成。OCT作用后细胞分泌EGF、TGF-α的量均明显减少。结论OCT在体内、体外均能有效抑制胃癌细胞MKN45的生长,可作为胃癌辅助治疗手段之一。【关键词】胃肿瘤;生长抑素;细胞周期;生长抑素;转化生长因子-αAbstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofsomatostatinanalogueoctreotide(OCT)onthegroechanism.MethodsTheeffectofOCToncellproliferationinvitroinedbyMTT.Cellcycleetry.

3、PlatecolonyformationassayinetheabilityofcolonyformationofMKN45cells.TumortransplantationinnudemiceedtoobservetheeffectofOCTongastriccancerinvivo.ThecontentsofepidermalgroinggroediaeasuredbyRIA.ResultsThegroannerandostpotentattheconcentrationof10-6mol/L.OCTarrestedthecellcycl

4、eatG0/G1phraseandreducedcolonyformation.TherepressionpotentialofOCTonthegroiceediaofMKN45cellsaybeapromisingadjuvanttherapyforgastriccancer.Keyatostatin;cellcycle;epidermalgroinggrog/支,瑞士诺华制药),RPMI1640培养基(Gibco),胎牛血清(杭州四季青公司),胰蛋白酶、Propidiumiodide(PI)、3-(4,5-dimethylthiazol-2

5、-YL)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide(MTT)(Sigma),生长抑素(EGF)RIA试剂盒(北京华英放射免疫技术研究所)、转化生长因子-α(TGF-α)RIA试剂盒(中国人民解放军总医院放免研究所)。1.2细胞培养人胃癌细胞株MKN45生长于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中,内加青霉素100×103U/L,链霉素100mg/L,37℃、5%CO2浓度及饱和湿度条件下常规培养。细胞呈单层贴壁生长,每3~4天以0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(1∶1)消化液消化传代。1.3MTT比色分析法对数生长

6、期的MKN45细胞消化后调整细胞密度为1×105/ml,接种于96孔板,每孔100μl,另加培养基100μl。37℃、5%CO2条件下培养24h后,更换无血清培养基继续培养24h分组:设空白组(不加细胞)、对照组(不加药)、OCT组(分为10-6、10-7、10-8、10-9mol/L4个浓度),每组6个复孔。继续培养72h,每24h更换新鲜培养基和奥曲肽。终止培养前4h加入MTT40μl/孔,避光孵育。结束培养时,吸去全部上清液,加入DMSO200μl/孔,微孔板震荡器震荡10min,酶联检测仪上测定光密度(D)值(λ=550nm)。按下列公

7、式计算细胞抑制率:抑制率=[(对照组D值-空白组D值)-(实验组D值-空白组D值)]/(对照组D值-空白组D值)×100%1.4平板集落形成实验对数生长期的MKN45细胞消化后吹打成单细胞悬液。将1000个细胞接种于含液体培养基的普通平皿中(平皿直径为9cm),分设对照组(不加药)和OCT组(培养基中加新鲜OCT,浓度为10-6mol/L),37℃、5%CO2孵箱中培养至细胞形成典型集落;以包含50个以上细胞为一个集落进行计数,普通平皿中的细胞经固定、苏木精-伊红染色、倒置显微镜下计数细胞集落。1.5流式细胞技术检测细胞周期对数生长期的MKN4

8、5细胞消化后调整细胞密度为1×105/ml,接种于50ml培养瓶,每瓶2ml。无血清培养基同步化24h后分组,设0、6、12、24、36、48h共计6

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