全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用【本科临床医学论文设计下载】.doc

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1、临床医学论文•全硫代反义寡核昔酸对卵巢癌细胞生长抑制作用作者：刘学单伟曾瑞霞房艳李德华秦书俭【摘要】冃的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脫氧核背酸，探讨端粒酶反义寡聚脫氧核莒酸(⑪仃senseoligodeoxynucleotides,ASODN)对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法①将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脫氧核苗酸(PhosphoTdthioatcsenseoligodeoxynucleotides»PS-SODN)组和不同剂量的全硫代反义寡聚脫氧核莒酸(Phosphorat・hioatcantisenseoligodco

2、xynucleotides，PS・ASODN)组；②脂质体介导的细胞转染后，PS-ASODN和PS・SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h，分别采用曲联免疫吸附法(ELISA)、口丫卩定橙染色法、四甲基偶氮口坐蓝比色法(MTT)、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋C和细胞周期的改变。结果①ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酚活性表达为阴性，说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性；②口丫口定橙染色观察细胞形态:PS・AS0DN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显

3、凋亡现象，凋亡细胞体积缩小，染色质浓缩，说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡；③MTT实验：PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖(P<0.01)，并呈一定剂量和吋间依赖关系；④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期：与空白对照组比较，PS-AS0DN组G0/G1期细胞明显增多，差异显著(PvO.Ol)；在G0/G1期前出现亚二倍体凋C峰，表明细胞被阻止在G1/S期。结论©PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后，卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制，并出现凋亡；②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系，

4、即抑制率随着反义寡核苜酸的浓度和作用时间的增加而增大；③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖，其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡，PS-ASODN对卵巢癌的治疗具冇重耍价値0【关键词】端粒酶全硫代反义寡聚脫氧核莒酸；卵巢癌HO-8910细胞；端粒酶；细胞凋亡[Abstract]ObjectiveInthisstudy，weapplyOligonucleotideaimeddircctlyathumantelomeraseRNA(hTR),TostudytheeffectsoftelomerasePhosphoralhio

5、aleantisenseoligodeoxynucleotides(PS・ASODN)ontelomeraseactivityandproliferationofH0・8910ovarycarcinomaeel1.Methods@HO-8910ovarycarcinomaCel1wastvansfeetedbyPS・ASODN,Phosphorathioatesenseoligodeoxynucleotides(PS-SODN)mediatedbyLipotapLiposomalTransfectionRcagcn.Theexperimentswereelassifiedintono

6、rmalgroup、PS・ASODNgroupsatvariedconcentrations、PS-SODNgroupandoligofcctamincTMalone.②TheprolifcrationactivityofH0・8910ovarycarcinomaeel11inewasdeterminedbyusingmethylthiazolyltetrazoliumassay.Thetelomeraseactivitywasdeterminedbyusingenzyme・linkedimmunosorbentassay.Theeel1morphologywasobservedby

7、fluorescencemicroscopestainedwithacridineorange.Flowcytometrywasadoptedtoexamineapoptoticrateandcel1cycle.Results①WithELISA,TelomeraseofHO-8910ovarycarcinomacellwasrepressedbytelomerasePS-ASODNafter72hlater,itshowedthattelomeraseP