斑蝥素抑制nfκb(p65)及smad3在高转移卵巢癌细胞株ho8910pm中的表达

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1、斑蝥素抑制NFκB(P65)及Smad3在高转移卵巢癌细胞株HO8910PM中的表达【摘要】目的：研究斑蝥素对HO8910PM细胞内NFκB(P65)、Smad3蛋白及NFκB(P65)mRNA表达的影响，探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制。方法：用Westernblot分析NFκB(P65)及Smad3蛋白的表达；RTPCR分析NFκB(P65)mRNA的表达。结果：25～100μmol/L的斑蝥素作用于HO8910PM细胞24h后，明显下调NFκB(P65)及Smad3蛋白表达和NFκB(P65)mRNA表达(P<0.01)，并呈一定的剂量效应

2、。结论：斑蝥素抗肿瘤侵袭、转移与抑制NFκB(P65)、Smad3蛋白和NFκB(P65)mRNA的表达有关。【关键词】斑蝥素；基因表达；肿瘤EffectsofcantharidinontheexpressionofNFκB(P65)andSmad3genesincellsofovariancarcinomacelllineHO8910PMwithhighlymetastaticpotentialHETaiping,HEZhenhui,MOLier,LIANGNianci(DepartmentofBiochemistry,Guangdon

3、gMedicalCollege,Zhanjiang524023,China)【Abstract】Objective:ToobservetheeffectsofcantharidinontheexpressionofNFκB(P65)andSmad3genesintheovariancarcinomacelllineHO8910PMwithhighlymetastaticpotentialinordertoelucidatethemechanismsinwhichcantharidininhibitstheinvasionandmetastasisof

4、tumor.Methods:TheWesternblotanalysiswasusedtodetecttheproteinlevelsofNFκB(P65)andSmad3,andtheRTPCRassaywasusedtoassessthemRNAlevelofNFκB(P65).Results:TheexpressionlevelsofNFκB(P65)andSmad3proteinsandNFkB(P65)mRNAwereinducedtodecreaseobviouslyinHO8910PMcellsbythe

5、treatmentwith5~20μmol/Lofcantharidinfor24hours.Conclusion:Thecantharidin'sactivityagainsttumorinvasionandmetastasisareinvolvedinthereductionofexpressionlevelofNFκB(P65)andSmad3proteinandNFκB(P65)mRNA.【Keywords】cantharidin;geneexpression;tumor斑蝥素（cantharidin）是从斑蝥中提取的一种活

6、性成分，它在治疗癌症和一些疑难杂症方面显示出其独特的疗效。研究证明斑蝥素首先抑制癌细胞RNA和DNA合成，继而影响蛋白质的合成，最终抑制癌细胞的生长分裂［１］。本课题组前期研究表明，斑蝥素有明显抑制高转移卵巢癌细胞(HO8910PM)的侵袭、趋化运动和粘附重组基底膜能力，并影响VEGF、uPA和FAK蛋白的表达。本文分别用蛋白印迹、RTPCR方法研究斑蝥素对核转录因子NFκB(P65)、Smad3蛋白和NFκB(P65)mRNA表达的影响，探讨斑蝥素抗高转移HO8910PM转移的作用机制。1材料与方法1.1实验材料人高转移卵巢癌细胞

7、(HO8910PM)购自上海细胞生物所，由浙江省肿瘤研究所许沈华等［２］建立。细胞在含10%(体积分数)小牛血清，100U/mL青霉素和100mg/L链霉素的RPMI1640完全培养基中，37　℃、5%(体积分数)CO2饱和湿度孵箱培养。细胞经过消化传代，取对数生长期的细胞进行培养。1.2药品与试剂超级小牛血清购自杭州四季青公司；RPMI1640培养基购自Gibco公司；4×上样缓冲液(125mmol/LTrisHCl，pH6.8，4%SDS，10%β巯基乙醇，20%甘油，0.04%溴酚蓝)；NFκB(P65)小鼠I