肿瘤抑制基因DOC2真核表达载体的构建及在卵巢癌细胞HO8910中的表达鉴定.doc

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1、肿瘤抑制基因DOC2真核表达载体的构建及在卵巢癌细胞HO8910中的表达鉴定作者：刘淑娟，韩军涛，辛晓燕，吴元明，陈苏民【摘要】　　目的构建肿瘤抑制基因DOC2的真核表达载体pCDNA3.1p93，将其转入人卵巢癌细胞系HO8910中，对其基因表达进行相关检测，为进一步研究DOC2的功能奠定基础。方法利用XhoI酶切含有p93cDNA的质粒得到p93cDNA基因片段，将其连接入真核表达载体pCDNA3.1，并通过酶切鉴定。用脂质体介导法将真核表达载体pCDNA3.1p93转染HO8910，通过G418筛选稳定表达克

2、隆；用免疫组化法观察人DOC2蛋白在HO8910中的表达。结果构建了DOC2的真核表达载体pCDNA3.1p93，并通过酶切鉴定。免疫细胞化学结果显示pIRES2EGFPp93成功转入HO8910中。结论成功构建了真核表达载体pCDNA3.1p93并在HO8910中得到稳定表达，为研究DOC2蛋白的功能奠定了基础。【关键词】DOC2　真核表达载体　卵巢癌　　ConstructionofTheEukaryoticExpressionVectorpCDNA3.1p93andItsExpressioninOvar

3、ianCancerCellLineHO8910　　Abstract：ObjectiveToconstructanrecombinantvectorconsistedofpCDNA3.1withDOC2cDNA(p93)andtransfectitintohumanovariancancercelllineHO8910inordertoinvestigatethefunctionofDOC2geneonovariancancercell.MethodsTherecombinantvector(pCDNA3.1p93)was

4、constructedbyXhoIanditscorrectionwasconfirmedbyrestrictionpattern.ThenpCDNA3.1p93wastransfectedintoHO8910byLipofectaminandthepositiveclone8910p93and8910pCDNA3.1wereselectedbyG418.Finally,theexpressionofDOC2in8910p93wasprovedbyimmuncytochemicalmethod.ResultsThere

5、combinantvectorpCDNA3.1p93wasconstructedsuccessfully.AfterbeingtransfectedintoHO8910,thepCDNA3.1p93positiveclonecouldbeharvestedbyG418andthesteadyexpressionofproteinDOC2wasconfirmedbyimmuncytochemicalmethod.ConclusionAftertherecombinantvectorpCDNA3.1p93beingconst

6、ructed,DOC2genecouldexpresssteadilyinHO8910.ThiswillallowustostudythefunctionofDOC2geneinfuture.　　Keywords：DOC2;Eukaryoticexpressionvector;Ovariancancer　　0引言5　　卵巢癌是妇科肿瘤中最常见的恶性肿瘤，其发病机制与抑癌基因的关系一直是该领域研究的热点[1]。1994年Mok等[2]在研究人正常卵巢上皮细胞与卵巢癌细胞的基因差异表达时，发现该基因在正常卵巢上皮细胞中有表达，

7、而在卵巢癌细胞系及组织中无表达，故将其命名为DOC2（Differentiallyexpressedinovariancancer2）。人类DOC2位于染色体5p13，长约35kb，含有15个外显子和14个内含子，cDNA共3268bp，编码长度为770个氨基酸的蛋白质，分子量约为82.5KDa[3]。DOC2是具有信号转导功能的新的磷蛋白，它能抑制多种肿瘤细胞的生长，被认为是一种可能的肿瘤抑制基因，但其作用机制尚未完全阐明。本研究中，我们构建了含有DOC2cDNA（p93）的真核表达载体，并转染人卵巢癌细胞系HO891

8、0，为研究DCO2在卵巢癌发生发展中的作用奠定了基础。　　1材料和方法　　1.1材料质粒pCDNA3.1(-)由本校生化教研室陈苏民教授惠赠；含有人DOC2cDNA的质粒p93由美国Dr.XuXiangxi惠赠；质粒转染试剂盒（Lipofecta