临床医学毕业论文肿瘤抑制基因2真核表达载体的构建及在卵巢癌细胞ho8910中的表达鉴定

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1、肿瘤抑制基因DOC2真核表达载体的构建及在卵巢癌细胞HO8910中的表达鉴定姓名：2014年6月25日肿瘤抑制基因DOC2真核表达载体的构建及在卵巢癌细胞HO8910中的表达鉴定作者：刘淑娟，韩军涛，辛晓燕，吴元明，陈苏民【摘要】0的构建肿瘤抑制基因DOC2的真核表达载体pCDNA3.1p93,将其转入人卵巢癌细胞系HO8910中，对其基因表达进行相关检测，为进一步研究DOC2的功能奠定基础。方法利用Xhol酶切含有p93cDNA的质粒得到p93cDNA基因片段，将其连接入真核表达载体PCDNA3.1,并通过酶切鉴定。用脂质体介导法将真核表达载体pCD

2、NA3.1p93转染HO8910，通过G418筛选稳定表达克隆；用免疫组化法观察人DOC2蛋白在HO8910中的表达。结果构建了DOC2的真核表达载体pCDNA3.1p93,并通过酶切鉴定。免疫细胞化学结果显示pIRES2EGFPp93成功转入HO8910中。结论成功构建了真核表达载体pCDNA3.1p93并在HO8910屮得到稳定表达，为研究DOC2蛋白的功能奠定了基础。【关键词】DOC2真核表达载体卵巢癌ConstructionofTheEukaryoticExpressionVectorpCDNA3.1p93andItsExpressioninO

3、varianCancerCellLineHO8910Abstract:ObjectiveToconstructanrecombinantvectorconsistedofpCDNA3.1withDOC2cDNA(p93)andtransfectitintohumanovariancancercelllineHO8910inordertoinvestigatethefunctionofDOC2geneonovariancancercell.MethodsTherecombinantvector(pCDNA3.1p93)wasconstructedbyXh

4、olanditscorrectionwasconfirmedbyrestrictionpattern.ThenpCDNA3.1p93wastransfectedintoHO8910byLipofectaminandthepositiveclone8910p93and8910pCDNA3.1wereselectedbyG418.Finally,theexpressionofDOC2in8910p93wasprovedbyimmuncytochemicalmethod.ResultsTherecombinantvectorpCDNA3.1p93wascon

5、structedsuccessfully.AfterbeingtransfectedintoHO8910,thepCDNA3.1p93positiveclonecouldbeharvestedbyG418andthesteadyexpressionofproteinDOC2wasconfirmedbyimmuncytochemicalmethod.ConclusionAftertherecombinantvectorpCDNA3.1p93beingconstructed,DOC2genecouldexpresssteadilyinHO8910.This

6、willallowustostudythefunctionofDOC2geneinfuture.Keywords:DOC2;Eukaryoticexpressionvector;Ovariancancer0引言卵巢癌是妇科肿瘤中最常见的恶性肿瘤，其发病机制与抑癌基因的关系一直是该领域研究的热点［1］。1994年Mok等［2］在研究人正常卵巢上皮细胞与卵巢癌细胞的基因差异表达时，发现该基因在正常卵巢上皮细胞中有表达，而在卵巢癌细胞系及组织中无丧达，故将其命名为DOC2(Differentiallyexpressedinovariancancer2)。人类

7、DOC2位于染色体5pl3,长约35kb,含有15个外显子和14个内含子，cDNA共3268bp,编码长度为770个氨基酸的蛋白质，分子量约为82.5KDa［3］。DOC2是具有信号转导功能的新的磷蛋白，它能抑制多种肿瘤细胞的生长，被认为是一种可能的肿瘤抑制基因，但其作用机制尚未完全阐明。本研宂中，我们构建了含有DOC2cDNA(p93)的真核表达载体，并转染人卵巢癌细胞系HO8910,为研宄DCO2在卵巢癌发生发展屮的作用奠定了基础。1材料和方法1.1材料质粒pCDNA3.1(-)由本校生化教研室陈苏民教授惠赠；含有人DOC2cDNA的质粒p93由美

8、国Dr.XuXiangxi惠赠；质粒转染试剂盒(Lipofectamine2000)购自GIB