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《乳腺癌转移抑制基因BRMS1真核表达载体构建及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、乳腺癌转移抑制基因BRMS1真核表达载体构建及鉴定作者：唐鲁兵高海东田春艳孙靖中刘焕涛马榕王甜甜【摘要】目的：构建乳腺癌转移抑制基因（BRMS1）真核表达载体pcDNA3.1/mycBRMS1，为研究抑制恶性肿瘤转移的机制奠定基础。方法：设计含有HindIII和XholB切位点的一对引物，应用逆转录聚合酸链式反应（RTPCR）技术从人乳腺癌细胞株MCF7中扩增到BRMS1的cDNA基因片断，经回收、纯化、酶切后，连接到质粒pcDNA3.1/mycHis（+）A上,鉴定正确后并转染人胚肾细胞HEK293进行West
2、ernblot验证其是否表达。结果：琼脂糖凝胶电泳及基因测序证实重组的pcDNA3.1/mycBRMSIcDNA的碱基组成与GenBank中的人BRMS1cDNA的基因片断组成相同。结论：成功构建了乳腺癌转移抑制基因BRMS1真核表达载体并测序鉴定。【关键词】乳腺肿瘤・转移抑制基因・BRMS1・M因表达Constructionandidentificationofeukaryoticexpressionvectorforhumanbreastcancermetastasi
3、ssuppressorl(BRMS1)【ABSTRACT1Objective:ToconstructrecombinedeukaryoticexpressionvectorpcDNA3.1/mycBRMS1cDNAsuccessfully.Thisisusefulforresearchingthemechanismsofmetastaticsuppression.Methods:Todesignapairofprimers,whichtworestrictionsitewithHindillandXhol,and
4、BRMSIcDNAfragmentswereamplifiedfromhumanbreastcancerMCF7byRTPCR.Theproductwasextracted,purifiedanddigestedwithHindIIIandXhoI,thenwasinsertedtoPcDNA3.1/mycHis(+)Aplasmid.TherecombinantstransfectedintoHEK293cellandwasidentifiedbyWesternblot.Results:Thebaseseque
5、nceofrecombinedpcDNA3.1/mycBRMS1cNDAwasinaccordaneewithhumanBRMS1cDNAfragmentsbyagarosegelelectrophoresisandDNAsequenceanalysis.Conclusion:Eukaryoticexpressionvectorforhumanbreastcancermetastasissuppressor1(pcDNA3.1/mycBRMS1)hasbeenconstructedsuccessfulyandDN
6、Asequeneewasanalyzed.[KEYW0RDS1Breastneoplasms・Metastasissuppressorexpressiongene・BRMS1・Gene与乳腺癌转移有关的基因分为转移促进基因和转移抑制基因两大类。乳腺癌转移抑制基因1(breastcancermetastasissuppressorl,BRMS1)是新发现的肿瘤转移抑制同其它月申瘤转移抑制基因(Nm23,KISS1,Kail,ECadherin,MKK4,TIMPs等)一样,
7、BRMS1并不影响原发肿瘤的生长,仅仅抑制癌细胞向远处部位转移[1]o为了进一步研究BRMS1,抑制恶性肿瘤转移的机制，我们应用RTPCR技术构建了带有BRMSIcDNA基因片段的真核表达载体PcDNA3.1/mycBRMS101材料与方法1.1材料1.1.1细胞与质粒人乳腺癌细胞株MCF7及人胚肾细胞株HEK293为军事医学科学院放射医学研究所惠赠，质料PcDNA3.1/mycHis(+)A购自Invitrogen公司。1.1.2引物设计与合成根据BRMSIcDNA序列，设计一对特异性引物，上游引物agaaag
8、cttccaccatgcctgtccagcc3,,含Hind山酶切位点；下游引物:5,gccctcgagaggtccatccgattttc3,,含XhoI酶切位点:pactin上游引物:actatgtttgagccttcaaca,下游引物:5catctcttgctcgaagtcca35由上海博亚生物技术公司合成。1.1.3试剂RNA提取试剂TRIZOL.SuperScri
