牛myostatin基因rnai真核表达载体的构建与鉴定

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1、西北农林科技大学硕士学位论文牛myostatin基因RNAi真核表达载体的构建与鉴定姓名：吕品申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：张涌20080501牛myostatin基因对怕i真核表达载体的构建与鉴定摘要Myostatin基因是肌肉生长的负性调控因子，通过抑制成肌细胞的增殖而发挥作用，Myostatin突变或缺失均可导致肌肉质量的显著增加，肌肉质量增加的原因既有肌细胞数量的增生也有肌纤维肥大。Myostatin基因表达的上调，由于抑制了肌肉蛋自质的合成，可导致肌肉质量的去失。Myostat

2、in基因对成肌细胞增殖有明显抑制作用，是通过剂量依赖和时间依赖方式进行的，而且对成肌细胞的抑制作用是可逆的。Myostatin诱导的DNA合成和细胞复制的抑制可能损害分解代谢疾病和衰老过程中肌细胞再生和肌肉质量恢复的能力。根据对该基因作用机制和表达的研究表明，它为基因治疗肌肉萎缩等消耗性疾病提供了理论基础和实践意义Myostatin信号的抑制对防止和治疗肥胖和糖尿病很有用。目前对于Myostatin基因的抑制肌肉生长的作用展开了较广泛的研究，国外的研究主流是试图通过基因敲除和转基因的方法达到增加肉产量

3、和提高肉品质的目的。本试验则采用RNAi技术特异性沉默牛myostatin基因的表达，构建了针对牛myostatin基因牛的重组干扰载体，为转基因动物的生产奠定了基础。1．分析了牛Myostatin基因的全长cDNA序列，然后按照siRNA设计的原则，利用RNA干扰在线生物学软件设计了针对牛Myostatin基因不同位置的4对sm斟A干扰序列(其结构特征为正链(19nt)．环(9nt)．负链(19nt))和一对阴性对照序列。2．通过DNA重组技术将双链干扰片段定向克隆到干扰载体中，构建了针对牛Myos

4、tatin基因的RN越真核表达载体GDF．8．1，GDF．8．2，GDF一8．3，GDF．8．4和f别生对照HK。转化DH5a大肠杆菌感受态细胞，对转化产物进行kan+筛选，碱裂解法提取重组质粒，将酶切鉴定为阳性的质粒测序。酶切鉴定和测序结果证明双链干扰片段可隆方向正确，序列中未出现核昔酸的插入，缺失等突变现象，表明靶向牛Myostatin基因的I矾加真核表达载体构建成功。关键词：牛Myostatin基因；对暇干扰；小发卡砌蛆CONSTRUCTIONANDIDENTIFICATIONOFRECOMBI

5、NANTSHRNAINTERFERENCEPLASMIDSTARGETINGTOBOVINEMYOSTATINGENEABSTRACTl9ntMyostatingeneisanegativeregulatorofmuscle伊ow啦itcaninllibbmusclecell’spr01iferation．7nlem吡撕onaIldde丘ciencyofmyos切rtingenecancauSetheraiseofq眦lti哆ofmuScle．ThereaSonmatmeraiseofquanti够o

6、fmuscleisprolif宅rationofmusclecellandhypertr叩hyofmuScle肋er．，rtleraiseofeXpressionofmyostatincalliIlllibitt11esyntllesizeofmuscleproteill’causetlledeclinationoftllequantityofmllscle．MyostatincaIl砒libitnleproliferationofmuSclecellbynledependenceofdosagean

7、dd印endenceoftime，andits矗mctionisre、，ersible．1kprefIabficationofDNAandmeresn．ainofcellreplicationbymeabductionofmyo涨证genecaIl蝎uredmemusclecell’sprolif．erationduringca讪Iolismillnessandserlescenceprocession．The咖dyofmyostatingeneisgoodforthecureofsweeny．The

8、i11hibitionofmyo蚴mgeneisgoodforpreVemandcurefatdiseaseandsugardiabetes．111ystudyonin址bitionofmuSclebymyosta_tingeneisactivelystudiedinrecentlyyears，111ordertoincreaSethequant蚵ofmllscle，tllem句orresearchmethodabroadisgene1(nockouta