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时间:2018-08-01
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1、Caspase8、3蛋白在PUVA诱导K562细胞凋亡时的变化【摘要】目的研究Caspase8、3蛋白在补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病K562细胞凋亡时的变化。方法用不同浓度的中药补骨脂中提取的PSO和(或)不同照射时间、波长为360nm的UVA作用于K562细胞,检测细胞凋亡率、在电镜下细胞超微结构改变及Caspase8、3蛋白的表达,用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加,后两者上调Caspase8、3蛋白的表达,PUVA的作用显著
2、强于前两者;PUVA处理后的K562细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变。结论PUVA可通过激活Caspase8、3基因诱导K562细胞凋亡。【关键词】光化学疗法K562细胞凋亡Caspase8Caspase3 Abstract:ObjectiveTostudythechangesofCaspase8andCaspase3proteinsinK562cellsduringapoptosisinducedbypsoralen(PSO)plusultravioletA(UVA)(PUVA).MethodsTheK562cellswe
3、retreatedwithPSOextractedfromChinesemedicinepsoraleafruitsindifferentconcentrationsplusUVA(360nm)indifferentirradiationtimeornot.Apoptosisratios,ultrastructurechangesandexpressionofCaspase8andCaspase93proteinsweredetected.Thefactorialdesignandanalysisofvariancewereuse
4、dtoanalyzetheinteractionamongthefactors.ResultsPSO,UVAandPUVAallincreasedtheapoptosisratiosandUVAandPUVAupregulatedtheexpressionofCaspase8andCaspase3proteins,buttheeffectsofPUVAwerethestrongest.TherewereobviousultrastructurechangesinapoptosisaftertreatmentwithPUVA.Co
5、nclusionPUVAcaninducetheapoptosisofK562cellsthroughactivatingCaspase8andCaspase3genes. Keywords:photochemotherapy;K562cell;apoptosis;Caspase8;Caspase3 化疗药物杀伤白血病细胞的主要途径是诱导细胞的凋亡,Caspases(Cysteinylasparatespecificproteinase)是一种特异性蛋白酶,以执行细胞凋亡而受到广泛关注[1~2]。Caspase8和Casp
6、ase3均属于该家族的成员,在凋亡过程中发挥重要作用,其中前者被认为是凋亡的启动者,后者被认为是凋亡的执行者[3]。PUVA是补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线(Ultraviolet9A,UVA)光化学疗法,目前的研究对象多为人工合成PSO衍生物,我们从中药补骨脂中提取了PSO,研究PUVA在诱导人类白血病细胞K562凋亡时Caspase8、Caspase3蛋白的变化,以进一步了解PUVA诱导白血病细胞凋亡的作用机制。 1材料与方法 1.1细胞株人慢性粒细胞白血病K562细胞由大连医科大学惠赠。常规培养于含10%小
7、牛血清的RPMI1640培养基(含硫酸庆大霉素0.025U/ml)中,于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中进行连续培养。 1.2药品及主要试剂 补骨脂素由大连理工大学及我院共同由纯中药补骨脂中提取和制备。RPMI1640培养液为Gibco产品。小牛血清系杭州四季青生物材料工程公司产品。HistostainTMPlUsKits免疫细胞化学分析试剂盒购自美国Zymed公司。DAB(3,3’diaminobenzidinetetrahydrochloride)显色试剂盒购自美国VectorLtd公司。Caspase8、Caspase
8、3兔抗人多克隆抗体购自CellScience公司。 1.3仪器和设备 流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特公司,GLY10型光量子血液平衡治疗仪由徐州华卫医疗设备公司研制。9 1.4流式细胞术测定 PUVA后24hK
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