辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制的研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制的研究姓名：胥国强申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：冯文莉;黄文芳20080501重庆医科大学硕士研究生学位论文LMAGE．3mlnm剐NAPBSPCRpHPIPVDFRnasin印mRPMll640RT．PCRSERCASDSTaqTBETEMEDTG％Spl“molliter升melanomaantigengene3黑色素瘤抗原基因3minute分钟messengerRNA信使RNAphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液polymerasechain

2、reaction多聚酶链反应potentialofhydrogen酸碱度propidiumiodide碘化丙锭PolyvinylideneFluoride聚偏二氟乙烯RNaseinhibitorRNA酶抑制剂roundperminute转／分Roswellparkmemorialinstitute1640RPMIl640培养基reversetriscriptionPCRsarco(endo)plasticreticulumCa2+_adenosinetriphosphatasesodiumdodecylsulfateTaqDNApolymeras

3、etris．boricacid．ED弱buffertetramethylethylenediaminethapsigargintris(hydroxymethyl)aminomethanemicrolitermicromol2逆转录PCR肌内质网Ca2+_ATP酶(钙泵)十二烷基硫酸钠TaqDNA聚合酶TBE缓冲液四甲基乙二胺毒胡萝卜素--(羟甲基)氨基甲烷微升微摩尔重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或

4、撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．学位论文作者签名：学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学．本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内

5、容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：指导教师签名：日期：重庆医科大学硕士研究生学位论文辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其分子机制的研究摘要目的：观察辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响，探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制。方法：109rnol／L，201amol／L，309mol／L不同浓度辛伐他汀作用K562细胞72h后：1．采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化。2．应用AnnexinV．FITC／PI双染法检测细胞凋亡率。3．DNALadder实验检测细胞凋亡条带。4．激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2

6、+浓度。5用线粒体分离试剂分离出胞浆蛋白、微粒体蛋白、线粒体蛋白。6．RT-PCR检测Bcl一2、Bax、Bak、IP3R、SERCA、GRP78、caspase一9，一7、一6、．3、GADDl53、Calpain、MAGEA一3基因mRNA表达。7．Westernblot检测GRP78、Calpain、Caspase一3，一6，一7，．9，-12、GADDl3、细胞色素C蛋白水平。结果：1．辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡，其作用具有浓度依赖性。2．AnnexinV—FITC／PI双染法检测结果显示，101xmol／L，209mol／L，309

7、mol／L辛伐他汀作用K562细胞72h能诱导其凋亡，细胞凋亡率分别为(12．414-0．32)％，(19．08+0．26)％和(23．414-0．36)％，与对照组(4．2+0．19)比较，差异具有统计学意义(P

8、较，差异具有统计学意义(P