毒胡萝卜素诱导k562细胞凋亡及其机制的实验研究

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1、毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡及其机制的实验研究作者：冯献启，游泳，肖娟，邹萍【摘要】本研究旨在探讨毒胡萝卜素对K562细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化，annexinⅤ-FITC/PI双染法FCM检测凋亡率的变化，Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM法荧光分光光度计测定细胞内Ca2+浓度（〖Ca2+］i）的改变，Rh123单染法FCM检测线粒体ΔΨm的变化，；mitochondrialtransmembrancepotentials(ΔΨm)etrythroughstainingofRhodam

2、ine(Rh123)；thechangesofcaspase-3，-7，-9，-12、cytochromeC、GRP78protEinsol/Lthapsigarginfor48hoursexhibitedtypicalmorphologicalchangesofapoptoticcellsunderfluorescentmicroscope，includingshrinkageofcell，condensationofchromatin，breakageofnuclear，formationofapoptoticbodies，fl

3、uorescenceofyelloatinshool/Lthapsigargin，theapoptoticratesofK562anner，ande-dependentinexperimentrange.Theenhancementof〖Ca2+］iandthedecreaseoftheΔΨminK562cellsentrange，paredeCfrommitochondria，upregulationofGRP78expressionattheendoplasmicreticulumol/Lthapsigargin.Itiscon

4、cludedthatthapsigargininducesendoplasmicreticulumstress-inducedapoptosisinK562cells.Endoplasmicreticulumisanovelimportantinitiatorysiteofapoptosisincells；thecleavageandactivationofcaspase-3，-7，-9，-12playveryimportantroleinendoplasmicreticulumstress-inducedapoptosisofK5

5、62cellsandisoneoftheimportantmechanismsforthapsigargin-inducedapoptosis.Thapsigargin-inducedapoptosisinK562cellsisassociatedcloselyandthereleaseofcytochromeCfrommitochondria，mitochondriaparticipatesinendoplasmicreticulumstress-inducedapoptosisinK562cells.　　Keyiacelllin

6、e；K562cell；apoptosis；endoplasmicreticulum；caspase　　化疗是目前治疗白血病的主要手段。虽然造血干细胞移植术是治疗白血病的理想方法，但是大部分患者由于无合适供者或不适合移植最终因化疗无效而死亡。白血病化疗无效的主要原因是白血病细胞突变及原发或继发耐药。因此，临床上亟需寻找针对白血病细胞内不同靶位点的新疗法。最近研究发现，内质网可能是细胞内诱导凋亡的一个新场所，即内质网应激反应性凋亡途径，它不同于经典的凋亡途径：死亡受体途径和线粒体途径［1，2］。作为一种新的凋亡通路，其确切机制尚未完全清

7、楚。本研究以白血病细胞系K562细胞为研究对象，以内质网Ca2+-ATP酶抑制剂毒胡萝卜素（thapsigargin，TG）为内质网应激诱导剂，初步探讨TG对K562细胞的凋亡诱导作用及其可能机制，为开辟白血病化疗新方案提供一定的实验和理论依据。　　材料和方法　　试剂和细胞系　　　细胞系K562细胞为本室常规培养；小牛血清、RPMI1640培养液均购自Gibco公司；吖啶橙（AO）、溴化乙锭（EB）为Sigma公司产品；兔抗人caspase-3，-12，GRP78多克隆抗体、鼠抗人caspase-7，-9，细胞色素C单克隆抗体、毒胡

8、萝卜素、Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM、化学发光剂LumiGLO、annexinⅤ-FITC试剂盒均购自晶美生物工程有限公司；考马斯亮兰CBBG250蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所；荧光染料Rh123、I1640培养液