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1、β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用作者：陈奕芝,方永奇,梁毅,王绮雯,何玉萍【摘要】目的研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机理。方法用谷氨酸造成PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果10mmol/L谷氨酸作用PC12细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加；7.5、15、30μg/mLβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少乳酸脱氢酶
2、渗漏；15、30μg/mLβ-细辛醚能明显降低谷氨酸引起的PC12细胞内钙离子浓度和细胞凋亡率。结论β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。【关键词】PC12细胞；谷氨酸；钙；β-细辛醚 Abstract：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectsofβ-asaroneonPC12cellsdamageinducedbyGlutamate.MethodTheeffectsofβ-asaroneonPC12cellsafterGlutama
3、teintoxicationonmorphology,extentofdamage,livability,intracellularcalciumconcentrationandapoptosisratiowereobserved.Result7Morphologicalchanges,LDHleakageandintracellularcalciumconcentrationincreasing,andcellsurvivaldecreasingwereobservedinPC12cellsexposuredt
4、oGlutamate.7.5,15,30μg/mLβ-asaronecanincreasecellsurvival,decreaseLDHleakage.15,30μg/mLβ-asaronecanreduceintracellularcalciumconcentrationandapoptosisratio.Conclusionβ-asaronepreventsthetoxicityofGlutamate,anditmaybeattributetoitseffectofanticalcium. Keyword
5、s：PC12cells；Glutamate；Ca2+；β-asarone 本实验采用体外培养PC12细胞方法,用谷氨酸(Glu)造成损伤模型,观察β-细辛醚对PC12细胞形态学、细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞内游离钙和细胞凋亡率的影响。 1实验材料 1.1细胞、药物和试剂7 高分化PC12细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所。Glu为Amresco产品；高糖DMEM粉剂培养基、胎牛血清、马血清、0.25%胰酶均为GIBCO产品；噻唑蓝(MTT)为Sigma公司产品；磷酸缓冲液(PBS)、二甲基亚
6、砜(DMSO)为北京鼎国产品；Annexinv-FITC试剂盒购自晶美生物工程有限公司；Fluo-3/AM为BiotiumInc产品；LDH试剂盒购自南京建成生物工程研究所；细胞培养板为CORNING产品。β-细辛醚的制备由本中心完成,纯度99.44%。临用前称取适量β-细辛醚与吐温-80及甘油,以1∶1∶1充分混匀后加灭菌双蒸水配成终浓度为10mg/mLβ-细辛醚溶液,用时培养基稀释至所需终浓度。 1.2主要仪器设备CO2培养箱(NUAIK)；倒置相差显微镜(OLYMPUS)；BIO-RAD550型酶标仪；A
7、LTRAEPICS流式细胞仪(BECKMANCOULTER)；6010紫外可见分光光度计(惠普上海分析仪器有限公司)。 2实验方法 2.1造模 复苏后的PC12细胞接种于25cm2培养瓶中,培养液为含5%马血清、5%胎牛血清的DMEM高糖培养基,37℃、5%C02培养箱中培养。待细胞长满单层,0.25%胰酶消化,用含血清的DMEM培养基终止消化并调细胞密度为5×104个/mL,接种在96孔培养板(弃去四周边孔),每孔100μ7L,四周边孔每孔加入等体积PBS溶液,待细胞贴壁生长交叉成网后用于实验。实验分为正
8、常对照组、Glu(0.3～76.8mmol/L)损伤组,继续培养16h后观察细胞形态改变,并用MTT法检测细胞活力。 2.2药物保护实验 PC12细胞接种于96孔(每孔100μL)及24孔培养板(每孔1mL),培养条件同上,待细胞铺满单层,吸弃原培养基,用PBS液洗1次,随机分为6组。正常对照组和Glu损伤组加入无血清培养基,阳性对照组加入终浓度为10μmol/L尼莫
