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时间:2018-08-01
《全反式维甲酸、亚砷酸对白血病nb细胞cd- c-变异体表达影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、中 文 摘 要 全反式维甲酸、亚砷酸对白血病NB4细胞CD44变异体表达的影响 摘要目的:急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)是急性髓细胞白血病(acutemyeloidleukemia,AML)的一个亚型,APL出现特异的染色体和基因改变,即伴有t(15;17)(q22;q21),形成PML/RARa融合基因,这是APL发病及应用全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)和亚砷酸(arsenictrioxide,As2O3)治疗有效的分子基础,其疗效已得到
2、国内外的公认。CD44是一种广泛分布的细胞表面跨膜糖蛋白,属于粘附分子家族,可通过选择性表达不同的外显子形成多种同源异构体,即标准型(CD44s)与变异型(CD44v)。CD44高表达于所有AML亚型原始细胞上[1]。应用CD44单克隆抗体能够不同程度的抑制多种髓系白血病细胞株的増殖并诱导细胞分化或凋亡[2]。有报道AML患者的骨髓及外周血中检测到了CD44v3、CD44v6及CD44v10等的高表达。CD11b是粘附分子整合素家族成员之一,它主要在成熟单核细胞、自然杀伤细胞、粒细胞上表达,属髓系相关分化抗原,是APL细胞向成熟分化
3、的重要分子标志。PML/RARa融合基因是APL特异的基因异常改变,随着APL向成熟粒细胞分化或凋亡,其表达逐渐减弱,可作为APL预后和疗效的判断标准之一。本研究采用ATRA、As2O3作用于人APL细胞株NB4细胞,通过光学显微镜观察细胞形态、MTT法观察细胞生长抑制状况、流式细胞术检测细胞分化及凋亡、并应用RQ-PCR法检测ATRA、As2O3作用前后NB4细胞CD44v3、CD44v6及CD44v10及PML/RARamRNA表达水平的变化。旨在探讨诱导APL细胞分化或凋亡过程中不同CD44v分子和PML/RARa表达的变化,
4、及二者的相互关系,为CD44v作为白血病诊断、疗效判断及预后指标提供理论依据。方法:体外培养人APL细胞株NB4细胞,分别用ATRA(1µmol/L)、As2O3(1µmol/L)、ATRA+As2O3(1µmol/L+1µmol/L)进行干预,应用MTT比色法检测细胞生长;用流式细胞术(FlowCytometry,FCM)分析以上药物1中 文 摘 要 对细胞分化的影响;AnnexinV-FITC/PI双标法检测上述药物对NB4细胞凋亡的影响;应用RQ-PCR法检测细胞中PML/RARa、CD44v3、CD44v6、CD44v10m
5、RNA的表达水平变化。所得结果运用SPSS13.0统计软件包处理,以a=0.05为显著性检验水准。结果:1ATRA、As2O3作用下NB4细胞的形态学改变:NB4细胞株具有急性早幼粒白血病细胞的典型形态,胞浆充满颗粒,核膜略凹陷,有空泡。Wright’s-Giemsa染色光镜下观察:经ATRA作用后NB4细胞体积变小、核浆比例缩小、染色质变粗糙、核仁消失;核形态不规则,呈肾形、杆状及分叶核。As2O3作用于NB4细胞后表现为细胞体积缩小,细胞膜完整,胞浆中出现空泡,核染色质浓缩、碎裂成块弥散在胞浆中,并可见膜结构包裹的凋亡小体。2A
6、TRA、As2O3对NB4细胞的增殖抑制作用:ATRA作用于NB4细胞24h、48h、72h、96h后生长抑制率分别为(1.75±1.47)%、(2.91±1.94)%、(7.80±0.56)%、(14.5±4.84)%;As2O3作用于NB4细胞24h、48h、72h、96h后生长抑制率分别为(3.31±1.02)%、(6.41±0.74)%、(9.43±1.92)%、(20.59±3.88)%;ATRA+As2O3作用于NB4细胞24h、48h、72h、96h后生长抑制率分别为(2.56±1.43)%、(16.45±2.51)%
7、、(20.5±2.56)%、(32.45±2.07)%;统计学分析显示,ATRA、As2O3及二者联用对NB4细胞均有增殖抑制作用,随时间延长,生长抑制率明显增加,各个时间点间比较,除ATRA组24h与48h之间无统计学差异(P>0.05)之外,其他时间点间差异均有统计学意义(P<0.05);同一时间点,各个处理组之间比较,24h各处理组之间无统计学差异(P>0.05),48h与96h各处理组之间均有统计学差异(P<0.05),生长抑制率As2O3+ATRA组大于As2O3组,大于ATRA组;72hAs2O3+ATRA大于As2O3
8、组和ATRA组,而As2O3组和ATRA组之间无统计学差异(P>0.05)。3ATRA、As2O3、ATRA+As2O3对NB4细胞表面CD11b抗原表达的影响:ATRA作用于NB4细胞48h、72h、96h后,CD11b抗原表达分别
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