tgf-β1基因转染bmscs后复合软骨细胞共培养

《tgf-β1基因转染bmscs后复合软骨细胞共培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、TGF-β1基因转染BMSCs后复合软骨细胞共培养作者：詹兴旺，李建鑫，卫剑，赵巍，詹兴秀【摘要】目的探讨应用TGF-β1基因转染和软骨细胞共培养后，促进大鼠BMSCs目的基因向软骨细胞的分化效果，为构建新型的软骨种子细胞提供思路。方法6周龄健康雄性Wistar大鼠、扩增、提取质粒pcDNA3.1-TGF-β1，酶切、电泳鉴定并测序。实验分组：TGF-β1基因转染BMSCs组(A组)、单纯BMSCs与软骨细胞共培养组(B组)、TGF-β1转染BMSCs后复合软骨细胞共培养组(C组)、空白BMSCs对照组(D组)、软骨细胞对

2、照组(E组)。结果电泳显示TGF-β1目的基因条带，基因测序与Gene-BankcDNA序列相符。MTT法测定A、B、C、D、E组细胞在490nm波长处的吸光度值，C组与A、B、D、E组间差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR和Westernblot检测目的基因和蛋白的表达量、TGF-β1表达均以C组最多，A组次之;Ⅱ型胶原表达以C组最多，A组次之。结论通过TGF-β1转染同时复合软骨细胞共培养能有效促进BMSCs向软骨细胞分化，是一个较有前景的发展方向，对组织工程软骨应用于临床具有重要意义。【关键词】BMS

3、Cs;共培养;软骨细胞;TGF-β1　　[Abstract]ObjectiveToinvestigatethesecretionoftarget13geneanddifferentiationofBMSCstransfectedbyTGF-β1andco-cultureandtogetherintochondrocytesandtoprovideanewmethodforculturingseedcellsincartilagetissueengineering.MethodsTheplasmidspcDNA3.1-TGF

4、-β1wereamplifiedandextracted，thencutbyenzymes，electrophoresedandanalyzeditssequence.BMSCsofWistarratswereseparatedandpurificatedbythedensitygradientcentrifugationandadherentseparation.Themorphologicchangesofprimaryandpassagedcellswereobservedbyinvertedphasecontras

5、tmicroscopeandcellsurfacemarkersweredetectedbyimmunofluorescencemethod.Accordingtothetransfectsituation，theBMSCsweredividedinto5groups，thetransfectedgroup(GroupA)，theco-culturegroup(GroupB)，thegroupofTGF-β1andco-culture(GroupC)，thegroupofBMSCs(GroupD)，thegroupofch

6、ondrocytes(GroupE).Afterbeingtransfected，thecellswereselected，thentheproliferationactivitywastestedbyMTTandexpressionlevelsweretestedbyRT-PCRandWesternblot.ResultsTheGroupCshowedthatithadagoodprospectandimportantsignificanceofclinicapplicationincartilagetissueengi

7、neering.TGF-β1genebands，genesequencingwereconsistentwithGene-BankcDNAsequences.TheabsorbancevaluewithMTTdeterminationofA，B，C，D，Egroupofcellsin490nmwavelength13inCgroupwasstatisticallydifferentwithA，B，D，Egroups(P<0.01).RT-PCRandWesternblotdetectionweredoneforgen

8、eandproteinexpression，TGF-β1expressioningroupCweremost，Agroupfollowedby;ⅡcollagenexpressioninCgroupwasmost，Agroupfollowedby.ConclusionByTGF-β1transfecti