bfgf基因转染bmscs对肺微血管内皮细胞的作用研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520512388南昌大学硕士研究生学位论文bFGF基因转染BMSCs对肺微血管内皮细胞的作用研究studyoneffectofbFGFgenetransfectedBMSCsonPMVECs聂强培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：温桂兰教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：内科学(呼吸)论文答辩日期：2015年6月2015年6月摘要学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和

2、致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有

3、限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按―章程‖规定享受相关权益。摘要摘要目的：COPD是一种常见的慢性呼吸道疾病，当前治疗主要以控制症状为主，本研究采用基因转染技术，将碱性成纤维细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞后，与肺微血管内皮细胞共培养，观察转染后的干细胞对肺微血管细胞的作用，以探索治疗COPD的新思路及新方法。方法：选取4周龄的SD大鼠（雄雌不限），采用骨髓贴壁细胞培养法分离

4、、培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）。外购bFGF-pcDNA3.1重组质粒，采用脂质体转染法将含有bFGF基因的质粒转染入BMSCs，荧光显微镜观察转染效率，Western-blot法观察重组质粒bFGF-pcDNA3.1转染及其目的蛋白的表达。转染后的bFGF-pcDNA3.1-BMSCs通过与肺微血管内皮细胞在transwell体系下共培养。本课题分为6个实验组，一个空白对照组，6个实验组分别为重组质粒组（A组）、空白质粒组（B组）、重组质粒转染组（C组）、空白质粒转染组（D组）、BMSCs组(E组)、PB

5、S组(F组)，空白对照组：单纯的肺微血管内皮细胞培养组，A组：重组质粒bFGF-pcDNA3.1与肺血管内皮细胞共培养，B组：空白质粒pcDNA3.1与肺血管内皮细胞共培养，C组：bFGF-pcDNA3.1-BMSCs与肺血管内皮细胞共培养，D组：pcDNA3.1-BMSCs与肺血管内皮细胞共培养，E组：BMSCs与肺血管内皮细胞共培养，F组：PBS液与血管内皮细胞共培养，以上各组细胞共培养后24h，48h，72h后观察肺微血管内皮细胞的增殖率情况。结果：1、成功提取并培养BMSCs，流式细胞仪表型检测CD29、CD

6、90阳性，CD34及CD11B阴性，所鉴定的即为所需BMSCs；2、质粒转染BMSCs后，荧光显微镜可见绿色荧光蛋白，初步表转染成功；3、重组质粒携带的bFGF基因成功转染入BMSCs中并通过Western-blot法检测其大量表达bFGF蛋白；4、重组质粒转染组为肺血管内皮细胞增值率最高的组别，其与PBS组、重组质粒及空白质粒组的细胞增值率对比，其均P<0.05；与空白质粒转染组及BMSCs组相比，统计后均P>0.05，但其较空白质粒转染组及BMSCs组肺微血管内皮细胞的增殖率有增高趋势，且增高趋势随共培养时间延长

7、，增高趋势越明显。空白质粒转染组与PBS组、重组质粒及空白质粒组的细胞增值率对比，均P<0.05，与BMSCs组相比，P>0.05。BMSCs组与PBS组、重组质粒及空白质粒组的细胞增值率对比，均P<0.05。结论：1.采用脂质体转染法成功将bFGF基因导入BMSCs并能大量表达摘要bFGF蛋白；2.BMSCs具有刺激肺血管内皮细胞增殖作用；3.转染bFGF基因的BMSCs具有刺激肺微血管内皮细胞增殖作用且具有时间依赖性，较未转染bFGF基因的BMSCs作用更强，但统计后两组增值率差异无统计学差异。关键词：碱性成纤维

8、细胞生长因子，骨髓间充质干细胞，共培养，慢性阻塞性肺病AbstractABSTRACTObjective:ChronicObstructivePulmonaryDiseases（COPD）wasacommonchronicdiseaseforrespiratorytract,andthecurrenttreatmentfocusuponsymp