鼠肺微血管内皮细胞损伤的干预作用-硕士论文

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1、安徽最科大学硕士学位论文论文题目PKC6抑制剂对脂多糖诱导大鼠肺微血管内皮细胞损伤的干预作用作者指导EffectofPKC6toPermeabilityInjuryofRatPulmonaryMicrovascularEndothelialCelisMonolayerInducedbyLPS姓名教师学科、专业研究方向论文工作时间朱钟鸣孙耕耘教授安徽医科大学第一附属医院呼吸内科内科学呼吸专业急性呼吸窘迫综合征2004年8月至2006年5月2006年5月学位论文独创性声明本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除

2、了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果．与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意．学位论文作者签名：／牡日期：—鲤毕学位论文使用授权声明本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定．学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定．学位论文作者签名。刍分鸸日期：

3、，侈声7导师签名日期历扣隶016一，一；o，{}’安徽医科大学硕士学位论文英文缩写一览表ALI：acutelunginjury急性肺损伤ARDS：acuterespiratorydistresssyndrome急性呼吸窘迫综合征PKC：proteinkinaseC蛋白激酶CEc：endothelialcell内皮细胞FITC-PHA：fluoresceinisothiocyanatephytohaematoagglatinin异硫氰酸标记的植物凝血素Kf：permeabilitycoefficient通透系数VIII：Ag：factorVIIIr

4、elatedantigenVIII因子相关抗原LPS：lipopolysaccharide脂多糖FBS：fetalbovineserum胎牛血清DMEM：Dulbecco’SModifiedEagleMediumDMEM培养基RPMVEC：ratpulmonarymicrovascularendothelialcell大鼠肺微血管内皮细胞PMA：phorboleaster佛波酯DG：diacylglycerol甘油二酯PBs：phosphate—bufferedsaline磷酸盐缓冲液PKSF：phenylmethylsulfonylfluori

5、de苯甲基磺酰氟EDTA：EthylenediamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸TBS：TrisbuffersalineTris缓冲盐THMED：tetramethylethylenediumine四甲基乙二胺SDS：sodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠BSA：bovine蝴albumin牛血清白蛋白F-actin：filamentousactin丝状肌动蛋白LBP：lipopolysacchaddebindingprotein脂多糖结合蛋白安徽医科大学硕士学位论文PKC6抑制剂对脂多糖诱导大鼠肺微血管内皮细胞

6、损伤的干预作用摘要目的：研究蛋白激酶c的亚型PKC6在大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)中的表达，通过观察脂多糖(LPS)诱导的RPMVEC损伤时PKC6表达的变化，以及PKC6抑制剂楸毒素(Rottlerin)对单层通透性增高的干预作用。探讨PKC特异性亚型在LPS诱导的RPMVEC损伤中的作用。方法：在体外分离、培养的RPM、／EC的基础上进行PKC6的Western印迹和免疫组化检测，以及LPS作用后PKC6表达的变化。用针头式滤器检测LPS及LPS+Rottlerin干预后RPMVEC单层滤过系数(Kf)的变化。结果l体外成功分离培养R

7、PMVEC，经形态学、VIII因子相关抗原及FITC—BSI结合实验证实所获得为RPwqEC；在细胞传代时采用含有EDTA的胰蛋白酶，缩短了消化传代的时间，减少了传代过程中胰蛋白酶对细胞的损伤；成功进行了细胞的冷冻和复苏，为今后的实验打下基础。2首先通过采用免疫组化的方法明确了PKC6在RPMVEC中有广泛的表达，其表达部位位于胞浆。Western印迹检测PKC6出现一条蛋白印迹条带，分子质量与蛋白质分子质量Mark相比，约为77KD，进一步证实了PKC6在RPMVEC中存在。采用lOllg／mlLPS作用RPMVEC60min后与正常对照组比较

8、，PKC6表达明显增高。3101．tg／mlLPS、5II形LRottlerin分别作用15、30、60、90、120min，LPS组R