vegf对低糖性脑微血管内皮细胞损伤的作用研究

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1、硕士学位论文VEGF对低糖性脑微血管内皮细胞损伤的作用研究作者姓名：赵飞学号：1127259543指导老师：赵玉武主任医师申请学位：硕士学科专业：神经病学研究方向：低血糖性脑损伤培养单位：上海交通大学附属第六人民医院答辩日期：2015年5月基金资助：国家自然科学基金资助项目（编号：31271125）MASTERDISSERTATIONEffectsofvascularendothelialgrowthfactorinculturedbrainmicrovascularendothelialcellsduringhypoglycemiaName:FeiZhaoS

2、tudentID:1127259543Advisor:ProfessorYuwuZhaoDegreeExpected:MasterDegreeDiscipline:NeurologyResearchField:HypoglycemicbraininjuryShanghaiSixthPeople’sInstitute:HospitalThesisDefenseDate:May2015Foundationfund：NSFC（No:31271125）上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工，本论文

3、不包含任何其他个人或集作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外研究做出重要贡献的个人和集体，均已体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的全意识到本声明的法律结果由本人承担。在文中Ｗ明确方式标明。本人完■学位论文作者签名：义〇日期：尽年今月７日上海交通大学学位论文版奴使用授巧书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部ｎ或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可臥将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保

4、存和汇编本学位论文。□。保密，在年解密后适用本授权书本学位论文属于不備〇。＂＂（请在＾＾Ｊｌ上方框内打Ｖ）学位论文作者签名：指导教师签〇：日期；之。年Ｓ月７日日期之巧年女月日７上海交通大学2012级硕士学位论文VEGF对低糖性脑微血管内皮细胞损伤的作用研究摘要低血糖是糖尿病患者采用胰岛素强化治疗时常见而严重的并发症。临床研究表明，低血糖诱发的脑水肿是低血糖性脑损伤的始动过程。脑微血管内皮细胞是血脑屏障重要组成成分，位于相邻内皮细胞间的紧密连接通过限制小分子物质通过进而维持脑组织内环境的稳定。但是，低血糖是否通过破坏紧密连接来影响

5、脑微血管内皮细胞功能引起脑水肿的发生迄今还没有被研究。血管内皮生长因子（Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF），作为调节血管功能的一个潜在因子，在脑缺血中具有保护作用已经被证实，并且还能促进神经元的存活及突触的生长。这些报道促使我们研究VEGF对低血糖性脑内皮细胞功能是否具有保护作用。我们采用永生化的小鼠脑微血管内皮细胞作为研究对象，体外模拟血脑屏障。首先，研究低糖条件对脑微血管内皮细胞的影响。通过采用荧光素钠（Na-F）检测暴露于低糖条件的跨内皮细胞的通透性；Westernblot和细胞免疫荧光（IF）检测紧密连接相关蛋白

6、claudin-5，ZO-1和occludin的表达变化和分布改变；乳酸脱氢酶实验（LDH实验）检测低糖对内皮细胞的毒性作用。结果显示，与正常葡萄糖组相比，低糖条件组（0、0.5、1mM）的跨内皮细胞通透性均明显升高，同时，紧密连接蛋白claudin-5的表达也相应下降。当较长时间（24h）较低糖浓度（0、0.5mM）时，脑内皮细胞毒性增加。进而，我们采用ELISA检测低糖条件下24h后培养基中的VEGF的分泌量，发现低糖条件组中分泌的VEGF含量比正常葡萄糖条件组中高。最后，通过外加VEGF研究低糖条件下VEGF对脑内皮细胞是否有保护作用，我们检测了低糖和V

7、EGF共存条件下跨内皮细胞通透性、紧密连接相关蛋白以及细胞毒性的变化。另外，我们还检测了转运葡萄糖的主要蛋白Glut-1和反映细胞凋亡程度的主要指标Bcl-2的表达上海交通大学2012级硕士学位论文变化。实验结果显示，与低糖组相比，低糖和VEGF共存条件下跨内皮细胞通透性降低、claudin-5表达相应增加以及内皮细胞的毒性显著下降。另外，Glut-1和Bcl-2蛋白表达水平比低糖组显著增加。综上所述，该研究发现低糖条件下紧密连接蛋白claudin-5表达下降，跨内皮细胞通透性增加，这可能是低血糖引起脑水肿的重要分子机制之一。同时，低糖时VEGF对脑微血管内皮

8、细胞可能具有保护作用。关键词：低血糖，