tgf-β1、bfgf双基因修饰bmscs的体外实验研究

《tgf-β1、bfgf双基因修饰bmscs的体外实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：寄么冬互签字日期：7。房年∥月／矽日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权直昌太堂可以将学位论文的全部或部分内容编

2、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：赤缀笙签-7-Ftgq：xot3年∥月p日导师签名(手写)：签字日期：7田乡年／月／oH摘要目的：分别构建含人碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)基因的真核表达载体和含人转化生长因子一pl(transfor

3、minggrowthfactor-lM，TGF．91)基因的真核表达载体，用脂质体介导的方法将这两种真核表达载体转染SD大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)，探讨bFGF与TGF．B1双基因能否共同修饰BMSCs及对它的增殖是否具有协同作用，为联合利用基因工程技术和牙周组织工程技术修复牙槽骨缺损提供初步实验依据。方法：通过PCR方法从质粒pDONR223．bFGF、pDONR223．TGF．pl中获得人bFGF和人TGF．Dl基因，将这两种目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3．1(+)上，构建真核表达载体pcDNA3．1(+)

4、-bFGF和pcDNA3．1(+)一TGF．91，用酶切和测序的方法来鉴定重组真核表达载体是否构建成功。分离培养SD大鼠BMSCs，用流式细胞仪鉴定其表面标志物。将构建成功的两种真核表达载体转染BMSCs，RT-PCR和Westernblot分别从mRNA水平和蛋白质水平检测BMSCs中bFGF和TGF．91基因的表达。通过MTT法检测转染后细胞的增殖情况，各组光密度值(OD值)均以均数士标准差(i±S)表示，两两样本均数比较用，检验，应用SPSSl7．0统计软件进行统计学分析，以P

5、+)．TGF．91经限制性内切酶酶切后，电泳后显示有468bp、1173bp的人bFGF和人TGF．D1目的基因片段及5428bp的线性化pcDNA3．1(+)载体片段。目的基因人bFGF的测序结果与经过优化的人bFGF基因碱基序列基本一致，人bFGF基因于447位有1个碱基突变：G—T，于467位有1个碱基突变：A—G，均为同义突变。目的基因人TGF．91的测序结果与GenBank中的人TGF．131基因碱基序列一致，无碱基突变。说明构建的真核表达载体中含有人bFGF和人TGF．Dl基因。(2)真核表达载体pcDNA3．1(+)-bFGF和pcDNA3．1(+)．TGF—p1转染SD大

6、鼠BMSCs24h后，通过RT-PCR和Westemblot检测到bFGF、TGF．B1基因的Il摘要表达，其蛋白分子量分别约为18kD和25kD。共转染组中既有bFGF基因的表达也有TGF．131基因的表达。(3)真核表达载体pcDNA3．1(+)-bFGF和pcDNA3．1(+)-TGF-131转染SD大鼠BMSCs24h后，对各组MTTOD值进行比较：pcDNA3．1(+)．bFGF组、pcDNA3．1(+)一TGF-131组、pcDNA3．1(+)-bFGF+pcDNA3．1(+)一TGF-131组、pcDNA3．1(+)组的OD值均高于空白对照组(尸

7、1(+)一bFGF组、pcDNA3．1(+)一TGF-131组、pcDNA3．1(+)一bFGF+pcDNA3．1(+)-TGF一131组的OD值均高于pcDNA3．1(+)组(P