tgf-β1基因修饰诱导脂肪干细胞成软骨分化的实验研究

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1、TGF-β1基因修饰诱导脂肪干细胞成软骨分化的实验研究作者：王洪林，闵繁红，王岩峰，谢永，张金刚，栾洪佳，侯旭东【摘要】［目的］本研究通过选择对软骨细胞ECM合成具有促进作用的TGF-β1转染脂肪干细胞（ADSCs），观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分：Ⅱ型胶原(typeⅡcollage,ColⅡ)和aggrecan的合成，为构建新型的组织工程软骨提供实验依据。［方法］TGF-β1基因转染脂肪干细胞及阳性细胞克隆株的筛选;RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(fibronectin,FN)、Col

2、Ⅱ、Aggrecan的表达；Western-blot检测TGF-β1。［结果］RT-PCR结果显示：实验组（TGF-β1稳定转染组）的TGF-β1、FN、ColⅡ、Aggrecan的表达较空染组和正常对照组均明显增多（P<0.01）；Westernblot检测实验组（TGF-β1稳定转染组）TGF-β1蛋白的表达较空染组和正常对照组均明显增多（P<0.01）。［结论］成功分离培养脂肪干细胞；以脂质体介导法将TGF-β1目的基因成功转染ADSCs，转染后成软骨分化的特异性细胞外基质增多，表明转染TGF-β1基因可以促使ADS

3、Cs向软骨细胞方向分化，从而为软骨组织工程提供新的思路和方法。【关键词】转化生长因子β1（TGF-β1）；脂肪干细胞（ADSCs）；基因转染；RT-PCR；Western-blot15Abstract:［Objective］ToinduceTGF-β1genewhichcanincreaseECMsynthesisintoadiposetissuederivedstemcells（ADSCs）byemployinggenetransfertechniquesandobservewhetherTGF-β1genecouldexpress

4、econtinuouslyandwhethertypeIIcollagenandaggrecanaresynthesizedinordertoprovideexperimentaldataforconstructingtissue–engineeringcartilage.［Method］ADSCsweretransferredwithTGF-β1gene,TGF-β1,FN,ColⅡandaggrecanweredetectedwithRT-PCRandTGF-β1proteinwasdetectedwithWestern-blot

5、.［Result］RT-PCRdemonstratedthattheexpressionofTGF-β1,FN,ColⅡandaggrecanintheTGF-β1genetransferredgroupsincreasedmoreevidentlythannon–genegroupsandcontrolgroups(P<0.01).WesternblotdemonstratedthatTGF-β1proteinintheTGF-β1genetransferredgroupsincreasedmoreevidentlythann

6、on–genegroupsandcontrolgroupssignificantly(P<0.01).［Conclusion］ADSCsofWistarratscouldbeseparatedandculturedsuccessfully.AfterTGF-β1genewastransferredstablyintoADSCs,thespecificextracellularmatrixofchondrocytedifferentiationincreasedevidently.Theresultsdemonstratedtha

7、tTGF-β1genecouldinduceADSCsintochondrocytes.Theexperimentprovidesanewmethedfor15constructingtissue–engineeringcartilage.Keywords：transforminggrowthfactor-β1（TGF-β1）;adiposetissuederivedstemcells(ADSCs);genetransfection;reversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)

8、;Western-blotTGF-β1对ECM的形成有重要作用。TGF-β1能促进体外培养软骨细胞合成II型胶原，有研究表明它可以促进ADSCs的软骨分化［1］。但体外培养中添加TGF-β1易流失，且TGF-β1因子价格