重组htgfβ1腺病毒转染bmscs对其向软骨分化的影响

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1、万方数据重组hTGF．131腺病毒转染BMSCs对其向软骨分化的影响夏万尧刘伟丁文龙钟梅芳周广东崔磊曾谊林【摘要】目的研究重组hTGF．131腺病毒(adeno．hTGF．81)转染BMSCs对其向软骨分化的作用。方法重组adeno．hTGF—B1转染第一代猪BMSCs，对照组转染adeno．LacZ，腺病毒的量以200pfu／细胞计算，转染后ld，消化收集重组腺病毒转染后的BMSCs．置于无菌15IIll聚丙烯试管中，体外细胞团聚集连续诱导培养21d，然后分别从大体观察、组织学和Ⅱ型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果实验组细胞团收缩成近似小球形的组织块，外观成乳

2、白色，触之有一定的弹性。苏木素．伊红染色观察可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜，下层和中部区域有巢状软骨形成，软骨陷窝明显可见，软骨细胞较均匀分布，包埋在软骨陷窝内。Safranin’O染色显示．形成的软骨组织区域有大量被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌，Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示细胞团中央出现较明显的阳性染色区域。可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。而对照组形成的组织块略小，苏木素．伊红染色观察见无软骨样组织形成，主要为较致密无结构特征的纤维样组织，Safranin’O染色也无被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示也无明显的阳性染色区。结

3、论应用重组hTGF．B1腺病毒转染的BMSCs进行细胞团聚集诱导培养，可诱导BMSCs向软骨细胞表型分化而形成软骨，为hTGF．131基因转染的BMSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。【关键词】骨髓间充质干细胞；基因转染；腺病毒；转化生长因子plEffectofadeno·hTGF-pltransfection011invitrochondrogenicdifferentiationofbonemalTowstromalcellsX／A形帆·yao，LIUWei，DINGWen—long，ZHONGMei-fang，ZHOUGuang-dD增，CUILei，CA0Yi-li

4、n．DepartmentofPlastic&ReconstructiveSurgery，ShanghaiKeyLaboratoryof咒ssueEngineering，TheNinthPeople’sHospital，SchoolofMedicine，鳓删咖iJiaotongUniversity，舶喇200011．China—Correspondingauthor：CAOYi—lin【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheactionofchondmgenesisdifferentiationofbonenlalTowstromalceHs(BM

5、SCs)transfectedwithadeno-hTGF一131．MethodsIntheexperimentgroup，replication—deficientadenovirusescarryinghumanhTGF-BlcomplementaryDNA(adeno-hTGF-B1WaSconstructedandappliedtotransfecttothefirstgenerationBMSCs．Asacontrol，eachBMSCswastransducedwith200pfuofadeno．LacZgene．Onedayaftertransfer，BMSCs

6、weretrypsinized。counted，and5×105cellsaliuotswerespundownat500rpmperminutein15mlpolypropyleneconicaltubesandthenculturedinadefinedmediuminanincubatorat37℃for21days．neaggregateswereharvestedattimepointstO21daysandassessedbygrossobservation，histologicalanalysesandimmunohistochemicallocalizatio

7、noftypeIIcollagen．ResultsWhenharvestedat21days．eachpelletshrinkedtOspheroidtissuewithapearlyopalescenceingrossmorphologyandfoundtoberelativelyfirm．H．EstainingshowedelongatedliningceHsappearedasperichondrium．1ikecellsatthesurface．Somenestsofcartilagewereo