pdgf-b、bmp-7促进bmscs向软骨细胞分化的实验研究

《pdgf-b、bmp-7促进bmscs向软骨细胞分化的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号R6密级公开UDC硕士学位论文PDGF-B、BMP-7促进BMSCs向软骨细胞分化的实验研究学位申请人：刘新宗学科专业：外科学指导教师：胡传义副主任医师杜远立教授二○一二年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineExperimentofPDGF-B,BMP-7PromoteBMSCstoDifferentiateintoChondrocytesGrad

2、uateStudent:LiuXinzongMajor:Surgery(Orthopaedic)Supervisor:Prof.HuChuanyiProf.DuYuanliChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2012三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。

3、对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得

4、导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：探讨原代骨髓间充质干细胞在体外分化为软骨细胞的条件。骨髓中提取原代骨髓间充质干细胞，体外利用BMP-7、PDGF-B诱导具有多分化潜能的骨髓间充质干细胞定向向软骨细胞分化，比较BMP-7、PDGF-B及联合时对其诱导分化的促进作用。方法：(1)无菌条件下收集健康、年轻患者因外伤截肢术后废弃骨骼中骨髓，4℃冷藏备用。（2）离心管内使用配制密度为1.073g/ml的Pe

5、rcoll分离液与稀释的骨髓分层放置，在1800g条件下低温离心机离心30分钟；吸取白雾细胞层与D-Hanks液混合并稀释三倍后1000g条件下低温离心10分钟，重复两次。(3)离心重悬细胞并取细胞进行计数，按比例接种细胞，用含15%FBS的LG-DMEM培养基在CO2培养箱培养扩增原代细胞，并行细胞形态学鉴定及流式检测细胞表面抗原。(4)MTT检测细胞增殖率，确定细胞因子使用浓度，进行实验分组。(5)诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化，进行细胞进行甲苯胺蓝染色、Westernblot及RT-PC

6、R检测Ⅱ型胶原蛋白含量及mRNA表达量，并予以统计分析。结果：(1)成功获得原代骨髓间充质干细胞并进行培养扩增；(2)行光镜观察细胞形态学鉴定及流式细胞术检测细胞表面抗原，符合间充质干细胞的特点；(3)不同浓度下MTT检测间充质干细胞的增殖效率，以BMP-7200ng/ml及PDGF-B75ng/ml浓度时细胞增殖活跃程度最明显；(4)在BMP-7、PDGF-B的参与下，骨髓间充质干细胞向软骨细胞定向分化；PDGF-B对分化过程的促进作用大于BMP-7对诱导过程的作用；PDGF-B与BMP-7联合

7、组对成软骨细胞分化过程的促进作用大于单用其中一种因子，可提高低剂量TGF-β的诱导效率。结论：成功提取BMSCs，进行成软骨诱导分化。PDGF-B与BMP-7在含低剂量TGF-β培养基诱导成软骨细胞的过程中具有促进诱导分化的作用；二者联合使用后诱导效率明显高于单用组，高于单用TGF-β组，为体外诱导分化软骨细胞提供了新的思路。关键词：血小板衍生生长因子-B骨形态发生蛋白-7骨髓间充质干细胞软骨细胞诱导分化三峡大学硕士学位论文AbstractObjectiveToinvestigatethefeas

8、ibilityofinducingmarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)differentiatedintochondrocytesinvitro.ExtractedoriginalgenerationBMSCsfrombonemarrowstromal,BMP-7,PDGF-BcaninductmultipotentBMSCsdifferentiateintochondrocytelineageinvitro,Comparingthedifferent