tgf-β1联合igf-1诱导bmscs复合丝素蛋白胶原蛋白支架构建功能软骨的研究

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1、分类号：R681学校代码：10062密级：学号：2012602732硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：TGF-β1联合IGF-1诱导BMSCs复合丝素蛋白/胶原蛋白支架构建功能软骨的研究TITLEResearchofTGF-β1combinedwithIGF-1inducedBMSCsseededoncompositesilkfibroin/collagenscaffoldtoconstructfunctionalcartilagetissue一级学科：临床医学二级学科：外科学骨外科论文作者：孙凯指导教师：李晖

2、天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R681学校代码：10062密级：学号：2012602732学位类别：科学学位☑专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：TGF-β1联合IGF-1诱导BMSCs复合丝素蛋白/胶原蛋白支架构建功能软骨的研究TITLEResearchofTGF-β1combinedwithIGF-1inducedBMSCsseededoncompositesilkfibroin/collagenscaffoldtoconstructfunctionalcartilaget

3、issue一级学科：临床医学二级学科：外科学骨外科论文作者：孙凯指导教师：李晖导师组成员：李瑞欣天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位

4、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：关节软骨损伤严重影响着人们的生活质量，同时骨关节软骨疾病开始趋于年轻化。目前临床上治疗此类疾病的方法主要包括自体或同种异体软骨移植，但给供区造成新的损伤，同时供体来源有限，不能满足临床需求。本研究在相关文献报道基础上，

5、利用天然材料丝素和胶原蛋白，冷冻干燥法来制备复合支架，TGF-β1联合IGF-1诱导BMSCs作为种子细胞，构建组织工程化培养模型，在微环境下诱导BMSCs向软骨细胞分化。方法：1.采用密度梯度离心法分离大鼠BMSCs，体外培养扩增并观察其特征。2.软骨方向诱导鉴定：取第三代BMSCs，加入软骨诱导液，2周后分别行甲苯胺蓝和番红素O染色。3.丝素蛋白/胶原蛋白组织工程支架的制备：以桑蚕丝和牛腱为原料制备丝素蛋白和胶原蛋白，将二者溶液按不同比例进行共混，冷冻，真空干燥，制备复合支架（编号1，2，3组）。检测每组支架材料的孔隙率、吸水率、力学

6、性能、孔径。取第三代骨髓间充质干细胞（BMSCs）接种支架，培养14天，利用噻唑蓝（MTT）、苏木素-伊红（HE）染色、扫描电镜（SEM）观察每组支架内部结构及细胞在内部的生长增殖。4.组织工程化培养模型的建立：构建组织工程化培养模型。实验共分三组：A组（联合诱导）、B组（无诱导）和C组（空白对照组）。5.阿利新蓝法测定培养模型体的酸性糖胺多糖的含量。6.组织工程化培养模型体外培养2周，利用免疫组化检测复合体中Ⅱ型胶原的表达。结果：1.采用密度梯度离心法成功分离大鼠BMSCs。3次传代后，BMSCs基本无杂质细胞，纯度较高。2.采用甲苯胺

7、蓝染色、番红素O鉴定诱导后软骨细胞表型。结果表明BMSCs具有多向分化潜能。3.1，2，3组孔隙率分别为94.6%±1.6%、80.6%±1.1%、60.6%±1.0%，组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)；吸水膨胀率分别为1623.7%±186.6%、991.0%±151.6%、559.6%±161.4%，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；支架均具有较好的粘弹性，弹性模量分别为(23.1±6.3)kPa、(25.1±5.1)kPa、(29.8±6.9)kPa，组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；孔径分别为(189±1

8、2)μm、(110±15)μm、(60±16)μm，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；MTT检测表明1组活细胞增殖高于2、3组(P<0.05)；HE染色见支架内部1组细胞数量明显I天津