bmscs复合壳聚糖-胶原蛋白修复兔大块关节软骨缺损

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1、壮京医学工农2o1o年4月第17卷第4期·论著·BMSCs复合壳聚糖一胶原蛋自修复兔大块关节软高桥(辽宁省彰武县中医院普外科，辽宁阜新123200)【摘要】目的使用同种兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复关节软骨缺损。方法体外培养扩增兔BMSCs。采用软骨诱导分化培养基对P2代细胞进行成软骨诱导，同时制备兔关节软骨缺损模型。诱导后细胞与事先制备好的“壳聚糖一胶原蛋白”支架复合．移植到软骨缺损区。术后于2、4、8、16周进行组织学评分并杀死动物行组织学染色。结果术后16周移植的细胞一致分化为软骨细胞，大部分软骨缺损区被新生软骨修复。结论应用BMSC

2、s结合“壳聚糖一胶原蛋白”复合物可以修复关节软骨缺损。【关键词】兔；骨髓间充质干细胞；软骨缺损中图分类号：R687．3文献标识码：Adoi：10．39360．issn．1674--4659．2010．04．042LargeArticularCartilageDefectsRepairedwithBoneMarrowStromalCellsandChitosan-collageninRabbitsGA0Q(DepartmentofGeneralSurgery,ZhangwuHospitalofTCM,Zhangwu123200,China)【Abs

3、tract】ObjectiveUsingthesameBMSCstorepairarticularcartilagedefects．MethodsBMSCswereculturedandproliferated．P2cellswerediferentiatedinchondrogenicmedium．Theinducedcellsthenweremountinthechitosan-collagenscafoldandtransplantedintotherabbits’cartilagedefectmode1．2，4，8，16weekslate

4、rtherabbitswerekilledandthenhistologicalstainingwasdone．ResultsAfter16weeksmostofthedefectsofcartilagewererepairedcompletely．ConclusionBMSCscombinedwithchitosan-collagenCanrepairarticu-larcartilagedefects．【Keywords】Rabbits；Bonemarrowstromalcells；Cartilagedefects关节软骨的修复能力有限，实验

5、表明软骨细胞和骨膜细胞紫外线照射1小时，移入冷冻干燥机内抽干48h，制成“壳聚修复方法在临床应用中受到供者资源的限制。近年来BMSCs糖一胶原蛋白”多孔支架收集细胞以5x106／ml与制备好的支在体外可分化为骨及软骨祖细胞，移植到软骨缺损区后具有软架混合，混合物在孵箱内孵育3O分钟，在2小时内移植入软骨化潜能[1]。胶原蛋白凝胶是一个成功的载体，在细胞移植并骨缺损区。且具有较低的抗原性[2]。壳聚糖是近年来发现的一种良好的生1．3软骨缺损模型制备与实验分组物载体。于是我们将来源于骨髓的骨、软骨祖细胞包埋在“壳通过承重的关节软骨到软骨下用3mm的钻

6、头在一个膝关聚糖一胶原蛋白”凝胶里．将移植物随后移植到骨软骨缺损区节上钻2个孔，制成全层软骨缺损(6mm长，3mm宽，3mill承重兔关节表面．观察其修复软骨缺损情况。深)。缺损用含有BMSCs的壳聚糖一胶原凝胶填充，另一条关节用没有细胞的支架或不做处理。其中l2个关节作为实验组1材料与方法(接受BMSCs+支架)，8个关节作为空白对照组(不做处理)，1．1BMSCs的制备8个关节作为单纯支架组(未植入细胞)，手术后所有的兔子返28只3—4月龄的新西兰白兔，平均重2．5Kg，肌肉注射回笼子中并允许自由活动。麻醉，通过一个小切口暴露出胫骨的近中间平

7、面，吸出软组1．4组织学评价织，用5ml注射器含有0．1ml肝素，10％FBS，100u／ml青霉兔子在手术后2，4，8，16周杀死，切开的整个关节用肉素，100gg／ml链霉素吸出2ml血液，培养箱内培养[，10—眼观察并拍照。每个样本垂直软骨缺损切片，用甲苯胺兰染14天细胞接近融合，然后用0．25胰蛋白酶一0．02EDTA消化，色。每个样本用组织学尺度评分[4]。评分包括5个种类。指标传代。P2代细胞采用软骨诱导分化培养基(Giboc)，诱导3天从0～14分。细胞形态从0(与相邻的未损伤的软骨组织一后收集细胞。样)到4分(没有软骨组织)；基质

8、染色或分光情况用甲苯胺1．2支架载体制备兰染色，从0(组织正常)到3分(无异染性)；表面规则性或将壳聚糖溶于0．1％M的醋酸。终浓度为2