柱形藻酸钙载体复合细胞修复异体兔膝关节软骨缺损论文

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1、柱形藻酸钙载体复合细胞修复异体兔膝关节软骨缺损论文.freel;alginate;chondrocytes;transplantation，homologousAbstract:AIMToreconstructthejointcartilagedefectsalginatecolumnbinedethodinrepairingjointcartilageinjury.METHODSCalciumalginatecolumnsmanipulatedinourlaboratoryerscaffoldsplicated-p

2、lesoftheanimaljointsinedat4，8and12edandthedefectscouldhardlybeseenroughly.CONCLUSIONCalciumalginatecolumnmightactasapolymerscaffoldofchondrocytesandbeusedintheresearchonjointcartilagere-construction.0引言关节软骨损伤后的修复一直是困扰骨科基础及临床研究的难点课题，已尝试应用的方法如关节软骨下骨钻孔，骨膜或软骨膜修补以及人

3、工生物材料修复，均有待临床进一步应用验证.组织工程学的方法对膝关节软骨损伤有重要的应用前景.我们根据海藻酸钠与二价阳离子结合的特殊性质，制备了藻酸钙柱形载体，并将其与软骨细胞结合修复兔膝关节软骨缺损.1材料和方法1.1材料海藻酸钠粉剂（Fluca公司），葡萄糖酸钙注射液（无锡第七制药厂），小牛血清（杭州四季青生物制品公司），胰蛋白酶（华美生物工程公司），Ⅱ型胶原酶，DMEM高糖培养基（Gibco公司）.软骨细胞的消化分离及与载体复合:取3m×0.5mm碎片，置10mL离心管中，以含抗生素生理盐水冲洗，离心后经2.5g

4、L-1胰蛋白酶消化30min，盐水洗2次，2gL-1胶原酶洗1次，继而消化90min，吸取上清，离心收集细胞于10mL离心管中，加入含200mLL-1小牛血清DMEM培养基0.5mL，取自行制备的藻酸钙载体4枚，以无菌纱布轻压吸干其内的DMEM后加入上离心管中，共同置37℃，含50mLL-1CO2孵箱中2h.残余软骨粒继续以胶原酶消化，每90min收集1次，共可收集4次，其后处理步骤同上.1.2方法修复兔膝关节软骨缺损用新西兰白兔12只（2～3mo龄，本校实验动物中心），雌雄不限，麻醉，消毒铺单后双膝髌内侧纵切口约2

5、cm，将髌骨向外侧脱位，显露髌股关节的股骨面，于股骨滑车中央用电钻钻出直径3mm，深3～4mm的全厚层关节软骨缺损，将复合有软骨细胞的藻酸钙柱形载体植入右膝关节软骨缺损处，并修整使之与周围关节面平齐.左膝植入空白藻酸钙载体作为对照，逐层闭合伤口，分笼饲养，不限制活动.另设完全空白对照动物3只（6膝），软骨缺损处未予任何处理.分别于术后4，8和12厚切片，行HE及甲苯胺蓝染色观察.2结果消化分离的软骨细胞数目可达50×106mL-1，应用台盼蓝拒染试验检测活力约为85%.术后4a等［11］在治疗输尿管返流的研究中将海藻

6、酸钠制成凝胶复合软骨细胞后注射于局部，获得满意的初期治疗效果.Shapiro等［12］制成海绵体样藻酸钙载体并成功复合成纤维细胞体外培养.不同浓度的藻酸钙凝胶放置一定时间或经特殊处理后可获得预定的形状及大小，而且具有一定的弹性和韧性，可根据缺损深度截取相应的长度，以满足不同缺损形状的要求.将其复合兔关节软骨细胞后，用手术方法植入关节软骨缺损中，可使其体积稍大于缺损，利用自身弹性稳定地镶嵌于关节软骨缺损中，而不需其他方法固定，本组动物未发生修复材料脱落现象.通过将软骨细胞复合于柱形藻酸钙载体，植入兔膝关节软骨缺损处，经

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