柱形藻酸钙载体制备及复合兔膝关节软骨细胞的初步观察论文

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1、柱形藻酸钙载体制备及复合兔膝关节软骨细胞的初步观察论文.freel，嵴上并可见10～20μm的小洞.复合细胞组可见网眼中有数目不等的软骨细胞.结论柱形藻酸钙载体初步具备作为软骨细胞载体的条件，可用于软骨组织工程的研究.Key;alginates;chondrocytes;tissueengi-neeringAbstract:AIMTofabricateaneerscaffoldfortheresearchontissueengineering.METHODSCalciumalgi-natecolumnal

2、ginateandcalciumgluconate.ThecolumnstructureofSEMined.Constructofthecolumnandchondrocytesinedbytoluidinebluestain-ingandSEM.RESULTSThecalciumalginatecolumnshoeshstructureallerholesintheberofchondrocytescouldbeseenamongthes.CON┐CLUSIONAsamaterialforchondro

3、cytescaffold，thecalci-umalginatecolumnmightbeemployedintheresearchoncar-tilagetissueengineering.0引言关节软骨损伤后有限的自身修复能力使其成为骨科基础及临床研究中的难点课题.freelm，深度8mm的特殊柱形模具中，每孔容积约0.2mL，放-20℃冰箱过夜，次日取出解冻后，经系列乙醇溶液脱水及定形，最后放入750mLL-1乙醇溶液中消毒备用.取样本冻干行扫描电镜观察.1.3软骨细胞的消化分离与收集取3周龄新西兰

4、白兔1只，雌雄不限，无菌切取双膝关节软骨并剪成约0.5mm碎片，置10mL离心管中，以含抗生素盐水冲洗，离心后2.5gL-1胰蛋白酶消化30min，盐水洗2次，2gL-1胶原酶洗1次，继而以之消化90min，吸取上清，800rmin-1离心10min，收集细胞于10mL离心管中，加入含200mLL-1小牛血清DMEM培养基0.5mL.残余软骨粒继续以胶原酶消化，90min收集1次，共可收集4次，其后处理步骤同上.1.4载体与软骨细胞的复合取制备好的藻酸钙载体4枚，复合细胞前用含200mLL-1小牛血清的D

5、MEM培养基冲洗浸泡.以无菌纱布轻压吸干其内的DMEM后加入上离心管中，应用毛细吸管将细胞混悬液滴于载体上，共同置37℃，含50mLL-1CO2孵箱中2h.1.5组织学及扫描电镜观察将制备的藻酸钙载体及其与软骨细胞的复合体行30μm厚冰冻切片，甲苯胺蓝染色观察细胞与载体复合情况，同时另取标本观察扫描电镜.2结果2.1消化分离的软骨细胞计数及活力测定消化分离的软骨细胞数目可达50×109L-1，应用台盼蓝拒染试验检测活力约为85%.2.2藻酸钙载体的大体及扫描电镜观察经处理所得的载体为圆柱状、白色，有一定的

6、强度和韧性（Fig1），扫描电镜见柱型藻酸钙载体为具有一定孔隙的网眼状材料，网眼较均匀，孔隙直径可达40～160μm，孔隙间嵴上并可见约10～15μm的小孔，部分嵴的表面不甚光滑（Fig2）.2.3藻酸钙-软骨细胞复合体的组织学及电镜观察甲苯胺蓝染色见载体材料为粉红色，蓝染的软骨细胞位于材料的网状空隙中，数目较多（Fig3）.扫描电镜可见在材料的孔隙中数目不等的软骨细胞呈圆球形（Fig4）.图1－图4略3讨论关节软骨损伤后的修复方法较多，但效果多不十分理想.组织工程方法自20世纪80年代提出后马上引起了广

7、大科学工作者的热切关注，也为关节软骨损伤的修复提供了崭新的思路，据此设想将少量软骨细胞（或具有成软骨能力的细胞）经体外扩增并复合于某种载体材料后植入体内，获得具有生物活性和力学性能的软骨组织，植入关节软骨缺损处，修复受损的关节软骨，改善关节功能，无论在理论还是在实践上均已取得了阶段性进展［1-5］.海藻酸钠是一种具有多糖结构的无毒的生物材料，已经美国FDA批准成功地应用于药物剂型研制及食品工业中，也是口腔修复科中常用的塑形材料，我国学者并对其含量及分子量等进行了研究［6，7］.不同浓度的藻酸钙凝胶放置一定

8、时间或经特殊处理后可获得预定的形状及大小，而且具有一定的弹性和韧性，根据这一性质，将其复合兔关节软骨细胞后，采用手术方法植于关节软骨缺损中，同时可利用细胞培养的方法使细胞数目进一步增加，以满足临床需要.Hapiro等［8］研制成海绵体样藻酸钙载体并成功复合成纤维细胞.另有学者将复合有软骨细胞的藻酸钙凝胶注射于裸鼠体内获得组织工程软骨［9，10］.国外学者还在治疗输尿管返流的研究中将海藻酸钠制成凝胶复合软骨细胞后注射于局部，获得