壳聚糖水凝胶复合脂肪间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究

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1、1»萑考乾硕士学位论文壳聚糖水凝胶复合脂肪间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究TheExperimentalStudyOntheRepairmentoftheRabbitArticularCartilageDefectsbyChitosanHydrogelCombinatedWithAdiposeDerivedStemCells作者：林涛导师：冯刚教授二〇一五年五月川北医学院硕士研究生学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其

2、他个人或集体巳经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。除与外单位合作项F1将予以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属川北医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：r戰X年》月&円川北医学院硕士研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家冇关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权川北医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或

3、扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“r’�:1.保密•,在—年解密后适用本授权书。2.不保密口。作者签名：n导师签名：.円期年&月1^曰中图分类号R681.3学校代码10634UDC616.7密级授予单位川北医学院壳聚糖水凝胶复合脂肪间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究TheExperimentalStudyOntheRepairmentoftheRabbitArticularCartilageDefectsbyChitosanHydrogelCombinatedWithAdiposeDer

4、ivedStemCells作者林涛导师冯刚教授培养院系临床医学系授位类别学术学位授位级别硕士学科门类医学学科专业外科学研究方向骨外科学（软骨组织工程）年级2012级学号201203101二○一五年五月致谢三年的研究生求学历程即将结束，站在毕业的门槛上，回首当年入学时的那一幅幅画面，至今仍历历在目，三年的求学生涯的快乐与艰辛,发自肺腑的感谢之情难于言表,在这段难忘的岁月里,正是得益于许多前辈和老师的悉心指导以及同事、朋友们的无私帮助才使我的学业得以完成，在此,我谨向所有给予我支持的人们致以深深的谢意。本课题是在导师冯刚教授的悉心指导，

5、严格教诲及导师的国家自然科学基金的资助下完成的，三年来，冯刚教授对我倾注了极大的心血，在课题设计、课题的开展、问题的解决、数据的整理、实验完成、论文修订以及工作生活的方方面面都给了我极大的帮助。冯刚教授创新的科研思维，严谨的治学态度、务实的科研作风和对事业执着追求的精神始终鞭策着我不懈的奋斗，是我以后工作的无限动力！值此论文完成之际，谨向冯刚教授表示最衷心的感谢！课题实验过程中，我得到了川北医学院组织工程与干细胞研究所陈竹、刘康助理研究员及各位师兄弟，特别是袁德超、邓尚、白亦光、罗栩伟、杨泽龙对我科研工作的支持和帮助，在此表示由衷感

6、谢。感谢川北医学院研究生处及各教研室全体领导、老师昔日对我学习、科研、生活和工作上的教育、帮助和鼓励。壳聚糖水凝胶复合脂肪间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究摘要目的：利用脂肪间充质干细胞作为种子细胞复合实验室自主研发的壳聚糖水凝胶支架构建组织工程软骨，并修复兔关节软骨缺损，探讨一种适用于临床治疗的关节软骨缺损修复方法。方法：(1)脂肪间充质干细胞的体外培养和鉴定：取24周龄新西兰大白兔皮下脂肪，胶原酶消化后体外扩增培养得到脂肪间充质干细胞，通过定向分化为软骨细胞鉴定其多能性。(2)壳聚糖水凝胶的制备：1,6-己二酸异氰酸酯和聚

7、乙二醇-400制备壳聚糖水凝胶的交联剂，将所得的交联剂加入2%（wt%）的壳聚糖溶液，室温下混合均匀后得到壳聚糖水凝胶，凝胶冻干后备用。(3)组织工程软骨的体外构建：脂肪间充质干细胞种植于灭菌后的壳聚糖水凝胶上，体外培养1周构建组织工程软骨。(4)关节软骨缺损修复评价：制作兔关节软骨缺损模型，并将动物随机分为3组。A组为对照组，B组为壳聚糖水凝胶材料组，C组为实验组，即植入体外初步构建的组织工程软骨的动物。分别于术后4周、8周、12周取样，通过大体观察、HE染色、Safranin-O及CollagenII免疫组化染色等方法观察缺损关

8、节软骨的修复情况，并用国际关节软骨修复协会ICRS制定的评分法进行大体及组织学评分。结果：(1)体外培养获得大量兔脂肪间充质干细胞，经鉴定其能很好的向软骨细胞分化，表明其完全可以作为组织工程软骨构建种子细胞来源。(2)大体观察可见：实