腺病毒介导tgf-β1基因转染兔骺板软骨细胞的实验研究

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1、分类号R618.4密级学校代码103672010703112617编号学号UDC2腺病毒介导TGF-β1基因转染兔骺板软骨细胞的实验研究Theexperimentalstudyofrecombinantadenovirus-mediatedTGF-beta1genetransfectingofrabbitepiphysealchondrocytes论文类别：学术研究型作者姓名阮晓军指导教师姓名周建生申请学位级别硕士学位授予单位蚌埠医学院学科专业外科学研究方向关节方向论文答辩时间2013年5月学位授予日期2013年6月答辩委员会主席：论文评阅人：2013年5月目录一、中文摘要……

2、…………………………………………………………………2二、英文摘要………………………………………………………………………4三．论文正文1、前言………………………………………………………………………72、材料和方法………………………………………………………………93、实验结果…………………………………………………………………174、讨论………………………………………………………………………20四、结论………………………………………………………………………24五、附图………………………………………………………………………29六、论文参考文献…………………………………………………………

3、…25七、中英文缩略词表…………………………………………………………39八、综述1、综述正文…………………………………………………………………422、参考文献…………………………………………………………………47腺病毒介导TGF-β1基因转染兔骺板软骨细胞的实验研究中文摘要目的：通过腺病毒介导TGF-β1基因转染兔骺板软骨细胞(EpiphysealChondrocytes，ECs)，观察TGF-β1的表达及ECs合成和分泌软骨基质的情况，为构建新型的组织工程骺板软骨提供实验依据。方法：1.利用3周龄新西兰大白兔股骨远端骺板软骨，分离出ECs并传代培养，观察ECs生长情况并鉴定。

4、选用第3代ECs进入下一步基因转染。2.构建携带TGF-β1基因的腺病毒载体。3.分3组进行转染：分别为TGF-β1载体组、空载体组和空白组。转染后在倒置显微镜下观察各组细胞形态以及增殖情况；并在荧光显微镜下观察各组病毒转染情况，同时计算转染效率。利用MTT法检测重组腺病毒转染后的ECs增殖能力是否有明显变化。应用ELISA法检测转染后收集到的各组培养液中的TGF-β1浓度。应用Ⅱ型胶原免疫荧光评价转染后细胞的成软骨能力。采用RT-PCR检测各组细胞TGF-β1mRNA的表达情况，并用Western-blot检测各组细胞Ⅱ型胶原和TGF-β1蛋白表达情况。结果：1、成功的从兔骺

5、板软骨中分离出ECs，并进行了传代培养及鉴定。2、在荧光显微镜下观察各组转染后细胞，发现TGF-β1载体组和空载体组有较多荧光细胞出现，而空白组始终没有出现荧光细胞，细胞转染成功。通过MTT法检测证明，腺病毒介导TGF-β1基因转染后的ECs的增殖能力短期内没有影响。3、转染14d后，TGF-β1载体组免疫荧光观察到Ⅱ型胶原较对照组明显增强。4、RT-PCR检测发现转染组标本中TGF-β1mRNA的表达较对照组明显增强。4、Western-blot结果显示转染组中CollagenⅡ和TGF-β1表达也明显增强。结论：1、本实验成功的从兔骺板软骨中分离出ECs，并进行了传代培养及

6、鉴定，证实了第3代ECs表型稳定，骺板软骨细胞的生物学及功能学特性表达良好。2、本实验成功的构建了携带TGF-β1基因的重组腺病毒载体，并运用重组腺病毒载体成功转染ECs，且转染率高，对细胞毒性小。3、利用基因转染技术将TGF-β1基因转染至ECs，可增强ECs合成和分泌软骨基质。关键词：TGF-β1腺病毒基因转染骺板软骨细胞Theexperimentalstudyofrecombinantadenovirus-mediatedTGF-beta1GenetransfectingEpiphysealChondrocytesAbstractObjective:Accordingto

7、thegenetransfectiontechnology,usetheadenovirustomediateTGF-beta1genetransfectingEpiphysealplatecartilagecells(EpiphysealChondrocytes,ECs),andobservetheexpressionofTGF-beta1andECssynthesisandsecretionofcartilagematrix,toprovideaexperimentalbasisforb