超声微泡造影剂促腺病毒介导的mdr1基因转染兔骨髓单个核细胞的实验研究

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1、7论著课题来源：国家自然科学基金（No.30600579）重庆市教育委员会科学技术研究项目（市教委KJ060304）作者简介：王佚（1975-），男，博士，主治医师，E-mail：wy757311@hotmail.com共同第一作者：郭振华（1982-），男，硕士研究生，主要从事肿瘤方面的研究。电话：13637901927。E-mail：gzh128203@163.com超声微泡造影剂促腺病毒介导的MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的实验研究王佚1郭振华1金先庆1郭玉霞1罗庆1王志刚2（1重庆医科大学附属儿童医院外科

2、实验室，重庆，400014；2重庆医科大学超声研究所，重庆，400010）摘要目的探讨超声微泡造影剂在体外促进腺病毒载体介导的MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的效率，并初步探讨其安全性。方法根据是否加入超声微泡造影剂和超声辐照将分选的兔骨髓单个核细胞分为常规培养组(A)、腺病毒转染组(B)、腺病毒转染＋超声辐照组(C)、腺病毒微泡造影剂转染组(D)、腺病毒微泡造影剂转染＋超声辐照组(E)。收集各组细胞，应用RT-PCR法、流式细胞技术等分别从基因、功能及细胞生物学特性等方面检测外源性MDR1基因在骨髓单个核细胞内的

3、功能性表达及安全性。结果收获高滴度的Ad5-MDR1腺病毒载体并成功制备腺病毒微泡造影剂；RT-PCR法显示，除A组外其余4组在194bp处均观察到特异性MDR1电泳条带，证实外源性MDR1基因通过腺病毒载体整合到细胞基因组中，且E组MDR1电泳条带的光密度比值明显高于B、C、D组（P＜0.05）；柔红霉素排出实验证实外源性MDR1基因表达产物P-gp有药物外排泵功能，且E组P-gp阳性率最高（P＜0.05），而柔红霉素阳性率显著降低；一定强度的超声辐照及微泡造影剂对骨髓单个核细胞的细胞周期无明显影响。结论低频超声

4、波击碎微泡造影剂，能促进以腺病毒为载体介导的外源性MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的效率，且安全可行。关键词MDR1基因；超声；微泡造影剂；基因治疗中图法分类号：R445.1，R394文献标识码：AStudyontheMDR1genetransferringintobonemarrowmononuclearcellsofrabbitmediatedbyadenovirousvectorenhancedbyultrasonicmicrobubblesWANGYi1,GUOZhen-hua1,JINXian-qing1

5、,GUOYu-xia1,LUOQing1,WANGZhi-gang2(1DepartmentofSurgery,CollegeofPediatrics,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400014;2DepartmentofUltrasonography,theSecondHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400010,China)Abstract:ObjectiveToexploretheefficacyands

6、afetyofMDR1genetransferringintobonemarrowmononuclearcellsofrabbitwithadenovirusvectorenhancedbyultrasonicmicrobubblesinvitro.Methods7Bonemarrowmononuclearcellsofrabbitwerecollectedanddividedinto5groupsafterculturingina6wellsplate:mononuclearcellsconventionalcu

7、lturegroup(A)；Ad5-MDR1group(B);Ad5-MDR1＋ultrasoundgroup(C)；Ad5-MDR1-microbubblesgroup(D)；Ad5-MDR1-microbubbles＋ultrasoundgroup(E).MDR1genewastransferredintothecellswithorwithoutultrasoundwaveirradiation，coculturingwithultrasonicmicrobubblesandAdenovirusvector.

8、Thecellswerecollected,andtheexpressionofMDR1geneinthemononuclearcells,thepositivetransferringrateandtheP-gpfunctionweretestedbyRT-PCRandflowcytometryatthedifferentlevelsofgeneexpre